| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-17页 |
| ·HBV 的基因结构 | 第9页 |
| ·HBV 前 S2 蛋白的生物学功能 | 第9-10页 |
| ·HBV 的复制功能 | 第10页 |
| ·HBV 与机体免疫应答的相关性 | 第10-11页 |
| ·有关 HBV 的临床研究 | 第11-12页 |
| ·前 S2 蛋白与金属硫蛋白的相互作用 | 第11页 |
| ·基因表达谱芯片技术的作用 | 第11-12页 |
| ·HBV 中前 S2 蛋白与 HBeAg 的相互作用 | 第12页 |
| ·前 S2 蛋白与乙型肝炎疫苗的关系 | 第12页 |
| ·HBV 疫苗的研究现状 | 第12-14页 |
| ·乙肝疫苗的种类 | 第14-15页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第15-17页 |
| 第2章 HBV/preS1-preS2-HBsAg 真核表达载体的构建及在 293 细胞中的表达 | 第17-33页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌株、质粒 | 第17页 |
| ·实验试剂 | 第17-18页 |
| ·仪器设备 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-26页 |
| ·引物设计与合成 | 第19-20页 |
| ·基因片段的合成 | 第20-21页 |
| ·琼脂糖凝胶 DNA 目的片段的回收 | 第21-22页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第22-23页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第23页 |
| ·转化感受态细胞 | 第23页 |
| ·挑选阳性克隆并鉴定 | 第23-24页 |
| ·质粒的小量提取 | 第24页 |
| ·细胞生物学相关操作 | 第24-25页 |
| ·抗生素的加压筛选 | 第25页 |
| ·单克隆细胞筛选 | 第25-26页 |
| ·高表达细胞株的形成 | 第26页 |
| ·重组载体质粒在 293 细胞膜蛋白的定位 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-32页 |
| ·Pro-UK-6*His-preS1-preS2-HBsAg(1-6)-HA 基因扩增的 PCR 结果 | 第26-27页 |
| ·酶切鉴定的结果 | 第27-28页 |
| ·测序结果 | 第28页 |
| ·稳定表达载体 pcDNA3.1/Pro-UK-6*His-preS1-preS2-HBsAg(1-6)-HA的构建示意图 | 第28-29页 |
| ·细胞转染荧光的检测 | 第29-30页 |
| ·蛋白质免疫印迹的结果 | 第30-31页 |
| ·重组载体质粒在 293 细胞膜蛋白的定位 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第3章 HBV/(preS1-preS2-FC)真核表达载体的构建及在 CHO-K1 细胞中的表达与纯化 | 第33-49页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·质粒、菌株 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第33-34页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第34-38页 |
| ·基因片段的合成 | 第34-35页 |
| ·DNA 目的片段的回收 | 第35-36页 |
| ·目的片段的双酶切 | 第36页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第36页 |
| ·转化感受态细胞 | 第36-37页 |
| ·挑选阳性克隆并鉴定 | 第37页 |
| ·质粒的小量提取 | 第37-38页 |
| ·细胞生物学相关操作内容 | 第38页 |
| ·有关高效表达单克隆细胞株的筛选 | 第38-42页 |
| ·抗生素的加压筛选 | 第38-39页 |
| ·高效表达细胞株无血清转瓶培养 | 第39页 |
| ·亲和层析法纯化目的蛋白 | 第39页 |
| ·目的蛋白的浓度和纯度鉴定 | 第39-40页 |
| ·蛋白质免疫印迹法鉴定 | 第40-42页 |
| ·结果 | 第42-46页 |
| ·重组载体 pcDNA3.1/preS1-preS2-FC 的 PCR 结果 | 第42页 |
| ·重组载体 pcDNA3.1/preS1-preS2-a`-FC 的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组载体 pcDNA3.1/preS1-preS2-a`-FC 的测序结果 | 第43页 |
| ·最终构建好的载体图 | 第43页 |
| ·蛋白质免疫印记的结果 | 第43-44页 |
| ·细胞转染后的检测 | 第44-45页 |
| ·亲和层系纯化结果、蛋白峰 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第4章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 缩略语词汇表 | 第55-57页 |
| 附录 A HBV/preS1-preS2-HBsAg 序列设计 | 第57-61页 |
| 附录 B 表达载体序列测定的结果 | 第61-64页 |
| 附录 C HBV/(preS1-preS2-FC)序列设计 | 第64-65页 |
| 附录 D 重组载体 pcDNA3.1/preS1-preS2-a`-FC 的测序结果 | 第65-67页 |
| 附录 E HBV/(preS1-preS2-FC)蛋白样品等电点检测图 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第69页 |
