| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·何首乌概况 | 第13-19页 |
| ·何首乌的主要化学成分 | 第13-14页 |
| ·何首乌的药理作用 | 第14-15页 |
| ·何首乌的生物技术研究 | 第15-16页 |
| ·芪类次生代谢产物及其生物合成途径 | 第16-19页 |
| ·dsRNA诱导RNA干扰技术 | 第19-24页 |
| ·RNA干扰的原理 | 第19-22页 |
| ·RNA干扰的特点 | 第22-23页 |
| ·RNA干扰的应用 | 第23-24页 |
| ·RNA干扰存在的问题 | 第24页 |
| ·本课题的研究背景及研究意义 | 第24-26页 |
| ·本课题的研究背景 | 第24-25页 |
| ·本课题的研究意义 | 第25-26页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第26页 |
| ·何首乌毛状根体系的建立 | 第26页 |
| ·Fm-STS基因过量表达与RNA干扰 | 第26页 |
| ·何首乌根茎叶中二苯乙烯苷的含量及Fm-STS基因的表达差异 | 第26-27页 |
| 第二章 过量表达质粒载体及RNA干扰载体构建 | 第27-49页 |
| ·前言 | 第27-28页 |
| ·实验材料与试剂 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·实验器材预处理 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·提取何首乌叶片中总RNA | 第30-31页 |
| ·目的基因Fm-STS获取 | 第31-35页 |
| ·dsRNA片段获取 | 第35-36页 |
| ·空白表达质粒检验 | 第36-38页 |
| ·过量表达质粒pBIN-35S -STS-GFP的构建 | 第38页 |
| ·干扰质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP的构建 | 第38-40页 |
| ·结果分析 | 第40-47页 |
| ·RNA提取完整性及空白质粒验证 | 第40-41页 |
| ·芪合酶基因Fm-STS扩增 | 第41页 |
| ·正向/反向片段扩增 | 第41-42页 |
| ·T-A连接 | 第42页 |
| ·双酶切及载体构建 | 第42-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 诱导何首乌毛状根及对其进行分析 | 第49-67页 |
| ·前言 | 第49-50页 |
| ·实验材料与试剂 | 第50-52页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·溶液配制 | 第51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-58页 |
| ·转化野生型发根农杆菌 | 第52-54页 |
| ·诱导毛状根 | 第54-55页 |
| ·培养毛状根 | 第55页 |
| ·毛状根检测 | 第55-56页 |
| ·HPLC之标准曲线制作 | 第56页 |
| ·HPLC测定毛状根中二苯乙烯苷含量 | 第56页 |
| ·毛状根中RNA提取 | 第56-57页 |
| ·Realtime PCR 测定芪合酶基因Fm-STS的表达差异 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-65页 |
| ·毛状根初期及检测 | 第58页 |
| ·毛状根中RNA完整性检测 | 第58-59页 |
| ·毛状根cDNA的PCR检测 | 第59-61页 |
| ·毛状根生长情况 | 第61-62页 |
| ·HPLC测定毛状根中二苯乙烯苷 | 第62-64页 |
| ·Realtime PCR | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 何首乌不同部位二苯乙烯苷含量以及芪合酶FM-STS时空表达差异 | 第67-74页 |
| ·前言 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·仪器与方法 | 第68页 |
| ·何首乌根茎叶中二苯乙烯苷的检测 | 第68-69页 |
| ·二苯乙烯苷标准曲线的绘制 | 第68-69页 |
| ·何首乌根茎叶中二苯乙烯苷的提取与测定 | 第69页 |
| ·何首乌根茎叶中芪合酶基因FM-STS的表达差异检测 | 第69页 |
| ·模板获取 | 第69页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-72页 |
| ·何首乌根茎叶中二苯乙烯苷含量 | 第69-71页 |
| ·何首乌根茎叶中芪合酶基因FM-STS表达差异 | 第71-72页 |
| ·结论 | 第72-74页 |
| 结论与展望 | 第74-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 发表论文情况 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 附件 | 第91页 |
