| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 牦牛病毒性腹泻/粘膜病病毒全基因测定与分析 | 第11-26页 |
| 1 材料与方法 | 第11-17页 |
| ·毒株、细胞及菌株 | 第11页 |
| ·主要试剂 | 第11-12页 |
| ·主要仪器 | 第12页 |
| ·牦牛株 BVDV 病毒增殖培养 | 第12页 |
| ·总 RNA 的提取及 cDNA 合成 | 第12-13页 |
| ·引物的设计与合成 | 第13页 |
| ·牦牛株 BVDV 各段基因的克隆 | 第13-15页 |
| ·牦牛株 BVDV3’-UTR 的扩增 | 第15-16页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因拼接及分析 | 第16-17页 |
| 2 实验结果 | 第17-23页 |
| ·新生犊牛睾丸细胞的制备及带毒检测 | 第17页 |
| ·牦牛株 BVDV 在细胞中增殖鉴定 | 第17-18页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因的扩增 | 第18页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因的序列测定及拼接 | 第18-20页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因结构状况 | 第20-21页 |
| ·牦牛株 BVDV 多聚蛋白氨基酸序列分析 | 第21-23页 |
| 3 讨论 | 第23-25页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因的扩增 | 第23页 |
| ·牦牛株 BVDV3’-UTR 的扩增 | 第23-24页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因结构特征 | 第24页 |
| ·牦牛株 BVDV 非致培养细胞病变型生物型的确定 | 第24-25页 |
| 4 结论 | 第25-26页 |
| 第二章 牦牛病毒性腹泻/粘膜病病毒全基因的生物信息学分析 | 第26-36页 |
| 1 材料与方法 | 第26-27页 |
| ·参考毒株 | 第26页 |
| ·生物信息学软件 | 第26页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-34页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因与其他毒株的进化关系 | 第27-28页 |
| ·牦牛株 BVDV 结构蛋白核苷酸序列和非编码区的序列解析 | 第28-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| ·牦牛株 BVDV 全基因组同源性分析 | 第34页 |
| ·牦牛株 BVDV 结构蛋白核苷酸序列分析 | 第34-35页 |
| ·牦牛株 BVDV 非编码区结构分析 | 第35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 牦牛病毒性腹泻/粘膜病病毒 E2 基因的真核表达与鉴定 | 第36-52页 |
| 1 材料与方法 | 第36-47页 |
| ·工程菌及克隆载体 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第38-39页 |
| ·缺失跨膜区域的牦牛 BVDV sE2 基因的扩增及纯化 | 第39-41页 |
| ·sE2 基因重组真核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·P.pastoris GS115 感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·牦牛株 BVDV sE2 基因的真核表达 | 第45-47页 |
| 2 实验结果 | 第47-50页 |
| ·sE2 基因的扩增结果 | 第47页 |
| ·sE2 基因的克隆及鉴定结果 | 第47页 |
| ·牦牛株 BVDV sE2 基因重组真核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·牦牛株 BVDV sE2 基因真核表达产物 SDS-PAGE 的检测结果 | 第48-49页 |
| ·牦牛株 BVDV sE2 基因真核表达产物的 Western-blot | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| ·表达 E2 蛋白的意义 | 第50页 |
| ·E2 基因跨膜区对表达的影响 | 第50页 |
| ·表达系统的选择 | 第50-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 第四章 文献综述 | 第52-60页 |
| 1 病原学 | 第52-53页 |
| 2 流行病学 | 第53-54页 |
| 3 临床症状与病理变化 | 第54-55页 |
| ·急性病毒性腹泻 | 第54页 |
| ·粘膜病(Mucosaidisease，MD) | 第54-55页 |
| ·免疫抑制 | 第55页 |
| 4 牛病毒性腹泻诊断技术研究进展 | 第55-58页 |
| ·病原学诊断方法 | 第55-57页 |
| ·血清学检测技术 | 第57-58页 |
| 5 牛病毒性腹泻防治研究进展 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 发表论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
