| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·鸡传染性法氏囊病研究概况 | 第9-10页 |
| ·病原学 | 第10-14页 |
| ·IBDV 抗原与毒力变异的分子基础 | 第14-15页 |
| ·IBDV 疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| ·IBDV VP5 基因的研究进展 | 第16-19页 |
| 2 研究目的和意义 | 第19页 |
| 3 拟解决的关键问题和研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 研究报告 | 第21-68页 |
| IBDV VP5 基因的原核表达及多克隆抗体的制备（研究试验一） | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·病毒毒株、菌株和质粒 | 第21页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·针对VP5 片段基因引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-27页 |
| ·VP5 片段基因的获取 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·连接与转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5 的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组阳性菌的诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物SDS-PAGE 电泳及Western blot 分析 | 第25-26页 |
| ·表达产物的纯化 | 第26页 |
| ·鼠抗VP5 蛋白多克隆抗体的制备 | 第26页 |
| ·多克隆抗体效价和免疫原性检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·目的片段的PCR 结果 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·表达产物SDS-PAGE 电泳 | 第28-30页 |
| ·Western blot 分析 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立 | 第31页 |
| ·抗VP5 蛋白多克隆抗体Western blot 鉴定和ELISA 效价测定 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 抗IBDV VP5 蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞的制备(研究试验二) | 第33-45页 |
| 1 试验材料 | 第33-34页 |
| ·病毒毒株与菌株 | 第33-34页 |
| ·试验动物、细胞系与主要试剂 | 第34页 |
| 2 试验方法 | 第34-39页 |
| ·免疫原制备及动物免疫 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立 | 第35页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第35-38页 |
| ·单克隆抗体鉴定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·免疫原的制备 | 第39-40页 |
| ·动物免疫水平效价的检测 | 第40页 |
| ·单克隆抗体的筛选 | 第40-41页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体上清及腹水效价的测定 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体稳定性及亚类鉴定 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体染色体分析 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 稳定表达IBDV VP5 蛋白Vero 细胞系的建立与功能研究（研究试验三） | 第45-68页 |
| 1 试验材料 | 第45-47页 |
| ·毒株、细胞与质粒 | 第45-46页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第46页 |
| ·主要实验仪器 | 第46-47页 |
| ·技术路线 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-55页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·VP5 目的基因片段的获取 | 第47-48页 |
| ·连接与转化 | 第48页 |
| ·真核重组质粒的的筛选及鉴定 | 第48-49页 |
| ·转染级高纯度真核表达质粒的制备 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第50页 |
| ·脂质体介导pcDNA3.1-Gt VP5 瞬时转染Vero E6 细胞 | 第50页 |
| ·单抗介导IFA 检测表达情况 | 第50-51页 |
| ·G418 加压筛选浓度的确定 | 第51页 |
| ·重组质粒的转染及细胞系的建立 | 第51-52页 |
| ·稳定表达VP5 蛋白纯细胞系的鉴定 | 第52-53页 |
| ·利用稳定表达VP5 蛋白细胞系进行的蛋白功能研究 | 第53-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-64页 |
| ·目的片段的PCR 结果 | 第55页 |
| ·真核表达质粒pcDNA3.1-Gt VP5 的鉴定 | 第55页 |
| ·转染级高纯度真核表达质粒的制备 | 第55-56页 |
| ·单抗介导IFA 检测pcDNA3.1-Gt VP5 瞬时转染Vero E6 细胞表达情况 | 第56页 |
| ·G418 加压筛选浓度的确定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的转染及细胞系的建立 | 第57页 |
| ·阳性培养孔的亚克隆筛选及纯化 | 第57-58页 |
| ·稳定表达VP5 蛋白纯细胞系的鉴定 | 第58-59页 |
| ·利用稳定表达VP5 蛋白细胞系进行的蛋白功能研究 | 第59-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| 第三章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
