| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-13页 |
| 第一部分:实验部分 | 第13-75页 |
| 第一章 牛MSTN基因敲除打靶载体的构建 | 第13-33页 |
| 1 材料与方法 | 第13-18页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·方法 | 第14-18页 |
| 2 结果 | 第18-26页 |
| ·和牛MSTN基因的表达检测 | 第18-19页 |
| ·MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN的构建 | 第19-23页 |
| ·MSTN基因敲除无启动子打靶载体PⅢ-MSTN的构建 | 第23-26页 |
| 3 讨论 | 第26-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 附图1:MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN构建流程图 | 第31-32页 |
| 附图2:MSTN基因敲除无启动子打靶载体PⅢ-MSTN构建流程图 | 第32-33页 |
| 第二章 MSTN基因敲除牛胎儿成纤维细胞的制备 | 第33-55页 |
| 1 材料与方法 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-39页 |
| 2 结果 | 第39-46页 |
| ·胶原酶消化法分离培养牛胎儿成纤维细胞的形态学观察 | 第39-40页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞电击参数的筛选 | 第40页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418抗药性的检测 | 第40-41页 |
| ·基因敲除打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN的纯化与线性化 | 第41页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的转染、筛选及单克隆细胞的扩大培养 | 第41-42页 |
| ·中靶克隆的PCR鉴定与测序分析 | 第42-45页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的染色体数目分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 附表:牛胎儿成纤维细胞在不同电击参数条件下的存活率 | 第50-51页 |
| 附图:跨载体PⅢ-MSTN同源左臂PCR片段与同源重组后预期MSTN序列的一致性分析 | 第51-55页 |
| 第三章 MSTN基因敲除牛胚胎的制备与移植 | 第55-67页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| 2 结果 | 第59-60页 |
| ·卵巢卵母细胞的采集和体外成熟 | 第59页 |
| ·牛卵母细胞的孤雌激活与体外发育培养 | 第59页 |
| ·重构胚的融合与体外发育培养 | 第59-60页 |
| ·克隆囊胚的胚胎移植 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 图版 | 第68-75页 |
| 第二部分:文献综述 | 第75-99页 |
| 第一章 哺乳动物基因敲除技术的研究进展 | 第75-90页 |
| 第二章 MSTN基因结构及功能作用的研究进展 | 第90-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第101页 |
