| 正文目录 | 第1-7页 |
| 图形目录 | 第7-9页 |
| 表格目录 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 第一章 脱毛蛋白酶产生菌的选育及其碱性蛋白酶基因的克隆 | 第16-53页 |
| 摘要 | 第17-18页 |
| 1 引言 | 第18-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| 3 结果 | 第30-44页 |
| ·脱毛蛋白酶产生菌的分离 | 第30-32页 |
| ·脱毛蛋白酶产生菌BA06的鉴定 | 第32-34页 |
| ·短小芽孢杆菌BA06胞外蛋白酶的性质研究 | 第34-36页 |
| ·短小芽孢杆菌BA06的诱变及筛选 | 第36-38页 |
| ·短小芽孢杆菌UN-31-C-42碱性蛋白酶完整基因的克隆 | 第38-42页 |
| ·短小芽孢杆菌不同突变菌株碱性蛋白酶基因的序列比较 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-49页 |
| ·脱毛蛋白酶产生菌的筛选 | 第44-45页 |
| ·短小芽孢杆菌BA06的诱变育种 | 第45-46页 |
| ·短小芽孢杆菌的碱性蛋白酶基因 | 第46-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 第二章 枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)高效转化方法的建立 | 第53-78页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 1 引言 | 第55-58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| 3 结果 | 第62-70页 |
| ·不同大肠杆菌菌株产生质粒多聚体的比较 | 第62-64页 |
| ·枯草芽孢杆菌WB600感受态细胞的制备 | 第64-65页 |
| ·质粒DNA与感受态细胞共培养过程对转化效率的影响 | 第65-67页 |
| ·恢复培养时间对转化效率的影响 | 第67-68页 |
| ·枯草芽孢杆菌WB600高效快速的转化方法 | 第68-69页 |
| ·其它芽孢杆菌的转化 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-75页 |
| ·枯草芽孢杆菌的转化方法 | 第70-71页 |
| ·质粒多聚体与枯草芽孢杆菌感受态转化 | 第71-73页 |
| ·本转化方法的特点 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 第三章 短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达研究 | 第78-117页 |
| 摘要 | 第79-80页 |
| 1 引言 | 第80-83页 |
| 2 材料与方法 | 第83-89页 |
| ·实验材料 | 第83-86页 |
| ·实验方法 | 第86-89页 |
| 3 结果 | 第89-106页 |
| ·碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第89-91页 |
| ·碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第91-93页 |
| ·碱性蛋白酶基因在短小芽孢杆菌中的表达 | 第93-95页 |
| ·碱性蛋白酶基因表达质粒在芽孢杆菌中的稳定性研究 | 第95-102页 |
| ·碱性蛋白酶基因启动子的功能研究 | 第102-106页 |
| 4 讨论 | 第106-114页 |
| ·短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第106-108页 |
| ·用于枯草芽孢杆菌基因表达的启动子 | 第108-110页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的质粒不稳定性 | 第110-112页 |
| ·提高外源基因在枯草芽孢杆菌中的表达水平 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 第四章 短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的定向进化研究 | 第117-144页 |
| 摘要 | 第118-119页 |
| 1 引言 | 第119-122页 |
| 2 材料与方法 | 第122-124页 |
| ·实验材料 | 第122-123页 |
| ·实验方法 | 第123-124页 |
| 3 结果 | 第124-134页 |
| ·蛋白酶基因定向进化策略 | 第124-125页 |
| ·蛋白酶基因编码区的随机突变 | 第125-127页 |
| ·碱性蛋白酶基因随机突变库的建立及突变体的筛选 | 第127-129页 |
| ·碱性蛋白酶基因突变体的鉴定 | 第129-134页 |
| 4 讨论 | 第134-141页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶的蛋白质工程 | 第134-135页 |
| ·定向进化研究中的主要影响因素 | 第135-137页 |
| ·突变体pSUBpMAp-37的性质 | 第137-141页 |
| 参考文献 | 第141-144页 |
| 文献综述 细菌碱性蛋白酶的研究及工业应用 | 第144-174页 |
| 摘要 | 第145-146页 |
| 1 细菌碱性蛋白酶产生菌 | 第146-148页 |
| 2 蛋白酶产生菌的选育 | 第148-149页 |
| 3 蛋白酶的发酵工艺 | 第149-151页 |
| 4 碱性蛋白酶基因的克隆和过量表达 | 第151-152页 |
| 5 碱性蛋白酶的特性及晶体结构 | 第152-155页 |
| ·pH及温度 | 第153页 |
| ·稳定剂及金属离子的影响 | 第153页 |
| ·底物特异性 | 第153页 |
| ·动力学参数 | 第153-154页 |
| ·晶体结构 | 第154-155页 |
| 6 蛋白质工程 | 第155-157页 |
| ·改变底物特异性与酶活性 | 第155-156页 |
| ·提高酶的稳定性 | 第156-157页 |
| ·提高有机相中的蛋白酶活性 | 第157页 |
| 7 酶的定向进化 | 第157-159页 |
| 8 碱性蛋白酶的前肽工程 | 第159-160页 |
| 9 发现新蛋白酶——土壤宏基因组(metagenome)的克隆 | 第160-162页 |
| 10 碱性蛋白酶的应用 | 第162-166页 |
| ·食品和饲料工业 | 第162-163页 |
| ·肽链合成 | 第163页 |
| ·皮革工业 | 第163-164页 |
| ·工业和生活废物的处理 | 第164页 |
| ·照片工业 | 第164-165页 |
| ·医学应用 | 第165页 |
| ·丝绸脱胶 | 第165页 |
| ·在去污工业中的应用 | 第165-166页 |
| 11 前景 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-174页 |
| 在读期间发表及待发表的论文 | 第174-176页 |
| 致谢 | 第176页 |
