| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-26页 |
| ·水稻化感作用及其研究意义 | 第11页 |
| ·化感作用的研究现状 | 第11-19页 |
| ·在种质资源筛选方面 | 第12页 |
| ·在化感作用的评价方法 | 第12页 |
| ·化感物质的提取、纯化和鉴定 | 第12-13页 |
| ·化感物质的种类 | 第13-14页 |
| ·化感作用机制研究 | 第14-15页 |
| ·抑制杂草种子发芽 | 第14页 |
| ·干扰激素平衡 | 第14页 |
| ·破坏膜的完整性 | 第14页 |
| ·影响光合作用 | 第14页 |
| ·影响呼吸作用 | 第14-15页 |
| ·影响杂草对养分和水分的吸收 | 第15页 |
| ·化感水稻的根际微生物研究 | 第15页 |
| ·环境胁迫下的化感作用及其诱导机制 | 第15-19页 |
| ·碳素/营养平衡(Carbon/Nutrient Balance,CNB)假说 | 第16页 |
| ·生长/分化平衡(Growth/Diferentiation Balance,GDB)假说 | 第16页 |
| ·最佳防御(Optimum Defense,OD)假说 | 第16-17页 |
| ·资源获得(Resource Availability,RA)假说 | 第17-19页 |
| ·逆境条件下水稻化感作用潜力变化的机理研究 | 第19-20页 |
| ·与本研究相关的RNA干扰技术及其应用 | 第20-26页 |
| ·作用机制 | 第21-22页 |
| ·特点 | 第22-23页 |
| ·应用 | 第23-24页 |
| ·RNAi技术在功能基因组中的应用 | 第23页 |
| ·RNA干扰技术是研究信号传导通路的新途径 | 第23页 |
| ·RNA干扰的封闭功能 | 第23页 |
| ·RNA干扰治疗人类疾病 | 第23-24页 |
| ·RNA干扰在植物抗病毒上的应用 | 第24页 |
| ·RNA在植物品质改良中的作用 | 第24页 |
| ·本研究的意义与相关研究内容 | 第24-26页 |
| 2.材料与方法 | 第26-32页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·常用分子生物学载体与试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·实验常用方法 | 第26-28页 |
| ·CTAB提取水稻基因组DNA | 第26-27页 |
| ·水稻叶片RNA的抽提--Trizol法 | 第27页 |
| ·载体构建中的酶切、连接和回收 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·大肠杆菌细胞的热激法转化 | 第27-28页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·农杆菌细胞的冻融法转化 | 第28页 |
| ·PAL基因片段的确定 | 第28页 |
| ·水稻RNAi载体的构建 | 第28-29页 |
| ·PAL基因片段序列的扩增 | 第28页 |
| ·PAL基因片段序列的回收以及与克隆载体的连接与测序 | 第28页 |
| ·表达载体PTCK-303-S的获得 | 第28页 |
| ·表达载体PTCK-303-S-A的获得 | 第28-29页 |
| ·PAL基因RNAi载体PTCK-303-S-A的农杆菌转化和转化子的鉴定 | 第29页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第29页 |
| ·水稻的组织培养 | 第29页 |
| ·水稻的转化 | 第29页 |
| ·转基因水稻的检测 | 第29页 |
| ·GUS染色 | 第29页 |
| ·PCR验证 | 第29页 |
| ·荧光定量PCR分析目的基因的表达 | 第29-30页 |
| ·组织总RNA制备以及纯度、完整性鉴定 | 第29-30页 |
| ·微量基因组DNA的去除 | 第30页 |
| ·cDNA合成 | 第30页 |
| ·FQ-PCR(两步法PCR扩增) | 第30页 |
| ·水稻PAL酶活性的测定 | 第30页 |
| ·水稻化感抑草潜力的检测 | 第30-32页 |
| ·试验Ⅰ | 第30-31页 |
| ·试验Ⅱ | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42页 |
| ·水稻PAL候选基因片段 | 第32页 |
| ·PAL候选基因片段的确定 | 第32页 |
| ·水稻RNAi载体的构建 | 第32-35页 |
| ·PAL候选基因片段的克隆与测序 | 第32-33页 |
| ·表达载体PTCK-303-S的构建与检测 | 第33-34页 |
| ·表达载体PTCK-303-S-A的构建与检测 | 第34-35页 |
| ·PAL基因RNAi载体PTCK-303-S-A的农杆菌转化和转化子的鉴定 | 第35页 |
| ·转基因水稻的检测 | 第35-37页 |
| ·GUS染色 | 第35-36页 |
| ·PCR验证 | 第36-37页 |
| ·荧光定量PCR分析目的基因的表达 | 第37-38页 |
| ·RNA纯度和完整性检测 | 第37页 |
| ·代谢途径中PAL基因FQ-PCR扩增曲线与融解曲线分析 | 第37页 |
| ·不同氮素条件下水稻苯丙烷代谢基本途径PAL基因表达的定量分析 | 第37-38页 |
| ·PAL酶活性的测定: | 第38-39页 |
| ·不同水稻化感潜力分析 | 第39-42页 |
| 4 讨论与结论 | 第42-45页 |
| ·RNAi技术的可行性 | 第42页 |
| ·候选PAL基因可能的作用 | 第42-43页 |
| ·候选PAL基因不同遗传转化方法的比较 | 第43-44页 |
| ·下一步的工作 | 第44-45页 |
| 参考文献: | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-53页 |
| 附录1 分子生物学实验中的体系建立: | 第50-51页 |
| PAL基因片段PCR扩增体系: | 第50页 |
| 酶切体系: | 第50页 |
| 连接体系: | 第50-51页 |
| 附录2 本研究所用基本培养基配方 | 第51页 |
| 1、YEB培养基 | 第51页 |
| 2、LB培养基 | 第51页 |
| 附录3 缩写词 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
