| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1 苜蓿组织培养研究进展 | 第10-12页 |
| ·基本培养基的选择 | 第10页 |
| ·外植体的选择 | 第10-11页 |
| ·激素配比 | 第11-12页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第11页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第11-12页 |
| ·紫花苜蓿再生体系建立存在的问题 | 第12页 |
| 2 植物抗病基因工程研究进展 | 第12-17页 |
| ·植物抗真菌基因工程 | 第12-15页 |
| ·几丁质酶(Chitinase)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-Glucanase) | 第12-13页 |
| ·PR 蛋白，核糖体灭活蛋白（RIP） | 第13页 |
| ·植物抗毒素（植物保卫素，Phytoalexin） | 第13-14页 |
| ·多聚半乳糖醛酸抑制蛋白（PGIP） | 第14页 |
| ·草酸氧化酶和葡萄糖氧化酶 | 第14页 |
| ·防御素（Defensin）和抗菌肽（Antibacterial Peptide） | 第14-15页 |
| ·其它类抗菌蛋白 | 第15页 |
| ·植物抗细菌病基因工程 | 第15-16页 |
| ·昆虫裂解肽 | 第15页 |
| ·溶菌酶(lysozyme) | 第15-16页 |
| ·其他抗菌肽 | 第16页 |
| ·植物抗病基因工程的前景展望及存在问题 | 第16-17页 |
| ·植物抗病基因工程的前景展望 | 第16页 |
| ·应用植物抗病害基因工程时应注意的问题 | 第16-17页 |
| 3 溶菌酶的研究进展 | 第17-21页 |
| ·溶菌酶的理化性质 | 第17-18页 |
| ·溶菌酶的分布 | 第18页 |
| ·溶菌酶的结构 | 第18页 |
| ·溶菌酶的种类及作用 | 第18-19页 |
| ·动物溶菌酶 | 第18页 |
| ·植物溶菌酶 | 第18页 |
| ·微生物溶菌酶 | 第18-19页 |
| ·溶菌酶的抗菌谱 | 第19页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第19-21页 |
| ·溶菌酶在应用过程中的优点 | 第20页 |
| ·溶菌酶主要的应用方面 | 第20-21页 |
| 4 绿色荧光蛋白（GFP）研究进展 | 第21-25页 |
| ·GFP 基础理论研究进展 | 第21页 |
| ·GFP 的结构、生化特性、发光机制、光谱特性 | 第21-22页 |
| ·结构 | 第21页 |
| ·生化特性 | 第21页 |
| ·发光机制 | 第21-22页 |
| ·光谱特性 | 第22页 |
| ·GFP 的改进 | 第22页 |
| ·GFP 的应用 | 第22-24页 |
| ·应用特点 | 第22-23页 |
| ·GFP 在分子生物学研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·问题及展望 | 第24-25页 |
| 第二章 不同苜蓿品种愈伤组织诱导培养基的优化 | 第25-33页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·供试植物材料 | 第25页 |
| ·植物激素 | 第25页 |
| ·主要实验设备 | 第25页 |
| ·基本培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·无菌苗的获得 | 第26页 |
| ·培养方法与条件 | 第26页 |
| ·实验设计 | 第26-27页 |
| ·数据统计及分析方法 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-31页 |
| ·不同培养基对秘鲁苜蓿愈伤组织诱导的影响 | 第27页 |
| ·不同培养基对甘农3 号苜蓿愈伤组织诱导的影响 | 第27-30页 |
| ·不同培养基对和田苜蓿愈伤组织诱导的影响 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-32页 |
| ·优化培养基的意义 | 第31页 |
| ·激素对愈伤组织诱导的影响 | 第31-32页 |
| ·利用正交设计法筛选最适愈伤组织诱导培养基 | 第32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 植物表达载体P81121-Lyz-GFP 的构建 | 第33-49页 |
| 1 实验材料和方法 | 第33-35页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·菌种和质粒 | 第33页 |
| ·常用酶和生化试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·基本培养基 | 第33-34页 |
| ·溶液配制 | 第34-35页 |
| 2 引物设计和技术路线 | 第35页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第35页 |
| ·P81121-Lyz-GFP 构建的基本技术路线 | 第35页 |
| 3 实验方法 | 第35-43页 |
| ·小量碱裂解法提取质粒 | 第35-37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·PCR 反应体系 | 第38页 |
| ·PCR 反应条件 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析PCR 结果 | 第38页 |
| ·PCR 产物回收 | 第38-39页 |
| ·GFP 基因PCR 产物与PUCm-T 载体的连接与转化 | 第39-40页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第39-40页 |
| ·PUCm-T-GFP 和P81121-Lyz 的酶切及纯化 | 第40-41页 |
| ·PUCm-T-GFP 的酶切处理及纯化 | 第40页 |
| ·P81121-Lyz 的酶切处理及纯化 | 第40-41页 |
| ·PUCm-T-GFP 与P81121-Lyz 酶切产物的连接与转化 | 第41页 |
| ·PUCm-T-GFP 与P81121-Lyz 酶切产物的连接 | 第41页 |
| ·载体转化至大肠杆菌DH5α | 第41页 |
| ·重组质粒P81121-Lyz-GFP 的PCR 和酶切检测 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的PCR 检测 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的酶切检测 | 第42页 |
| ·植物表达载体向农杆菌的转化 | 第42-43页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·液氮冻融法直接转化农杆菌 | 第43页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-46页 |
| ·克隆目的基因 | 第43-45页 |
| ·GFP 基因片段的PCR 扩增结果 | 第43页 |
| ·PUCm-T-GFP 基因的扩增和双酶切 | 第43-45页 |
| ·植物表达载体P81121-Lyz-GFP 的构建及检测 | 第45页 |
| ·植物表达载体P81121-Lyz-GFP 转化根癌农杆菌 | 第45-46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| ·关于植物表达载体P81121-Lyz-GFP 构建策略的讨论 | 第46-48页 |
| ·表达载体的改造 | 第46-47页 |
| ·研究方法的改进 | 第47页 |
| ·P81121-Lyz-GFP 表达载体的特点 | 第47-48页 |
| ·关于对农杆菌的转化及其鉴定 | 第48-49页 |
| 第四章 农杆菌介导的P81121-Lyz-GFP 基因对紫花苜蓿的转化研究 | 第49-61页 |
| 1 材料和方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·质粒和农杆菌菌株 | 第49页 |
| ·农杆菌培养基 | 第49页 |
| ·培养基类型 | 第49-50页 |
| ·抗生素 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-52页 |
| ·卡那霉素浓度对和田苜蓿种子萌发的影响 | 第50页 |
| ·筛选培养中卡那霉素选择压的确定 | 第50页 |
| ·筛选培养中抗生素种类及其浓度的对农杆菌增殖的影响 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的基因转化方法 | 第50-51页 |
| ·转化体系的建立 | 第51-52页 |
| ·转基因愈伤组织的鉴定 | 第52-53页 |
| ·PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·荧光显微镜下的鉴定 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-58页 |
| ·卡那霉素浓度对和田苜蓿种子萌发的影响 | 第53-54页 |
| ·筛选培养中卡那霉素选择压的确定 | 第54页 |
| ·筛选培养中抗生素种类及其浓度的确定 | 第54-56页 |
| ·转化体系的建立 | 第56-57页 |
| ·侵染时间对转化率的影响 | 第56页 |
| ·预培养时间对转化率的影响 | 第56-57页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第57页 |
| ·和田苜蓿转化愈伤组织的鉴定 | 第57-58页 |
| ·PCR 分子鉴定 | 第57-58页 |
| ·转基因愈伤组织的GFP 检测结果 | 第58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| ·农杆菌菌株对转化的影响 | 第59页 |
| ·抗生素对愈伤组织诱导的影响 | 第59页 |
| ·关于绿色荧光蛋白的检测 | 第59-60页 |
| ·后续研究工作展望 | 第60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附图 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68-69页 |
| 指导老师简介 | 第69-70页 |
