| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-25页 |
| 第一章 水稻黄单胞菌致病机理研究进展 | 第11-19页 |
| 1 水稻黄单胞菌概述 | 第11-12页 |
| 2 植物病原细菌致病相关基因 | 第12-13页 |
| 3 黄单胞菌的主要致病生化因子 | 第13-15页 |
| ·多糖 | 第13页 |
| ·毒素 | 第13-14页 |
| ·胞外酶 | 第14页 |
| ·依赖于hrp基因的效应分子 | 第14-15页 |
| ·依赖于asp基因的效应分子 | 第15页 |
| ·生长激素 | 第15页 |
| 4 水稻白叶枯病菌的基因组结构 | 第15-16页 |
| 5 基因的水平转移与病原菌的进化 | 第16页 |
| 6 病原菌致病生化因子的调控 | 第16-19页 |
| ·双组分调控系统 | 第17页 |
| ·σ因子 | 第17-18页 |
| ·群体感应调节系统(Quorum-sensing) | 第18-19页 |
| 第二章 双精氨酸蛋白运输系统的研究进展 | 第19-25页 |
| 1 Tat系统信号肽 | 第19-20页 |
| 2 Tat系统的底物蛋白质 | 第20-21页 |
| 3 Tat系统组分 | 第21-23页 |
| 4 功能与应用 | 第23-25页 |
| 第二部分 研究内容 | 第25-84页 |
| 第一章 水稻白叶枯病菌tatB和tatC基因的克隆及功能研究 | 第25-57页 |
| 1 材料与方法 | 第26-42页 |
| ·试验所涉及的菌株、质粒和引物 | 第26-27页 |
| ·培养基及抗生素 | 第27-29页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第31页 |
| ·DNA酶切、连接和PCR扩增产物回收 | 第31页 |
| ·质粒的转化 | 第31-33页 |
| ·Southern杂交 | 第33-35页 |
| ·PCR反应 | 第35-36页 |
| ·整合突变体的构建 | 第36-37页 |
| ·互补菌株的构建 | 第37-38页 |
| ·胞外纤维素酶的检测 | 第38-39页 |
| ·铁载体(siderophore)的检测 | 第39页 |
| ·生物膜的检测 | 第39页 |
| ·胞外多糖(EPS)的检测 | 第39页 |
| ·游动性和趋化应答试验 | 第39-40页 |
| ·细胞形态和鞭毛观察 | 第40页 |
| ·HR和致病性的测定 | 第40页 |
| ·总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-54页 |
| ·tat,tatB和tatC基因的克隆 | 第42-44页 |
| ·tat基因的序列分析 | 第44-45页 |
| ·tatB和tatC突变株的构建 | 第45-48页 |
| ·TBM和TCM互补菌株的构建 | 第48页 |
| ·tatB和tatC基因的突变不影响Xoo正常生长 | 第48-49页 |
| ·tatB和tatC基因突变后不影响胞外纤维素酶的产生 | 第49-50页 |
| ·tatB和tatC基因突变后不影响细菌铁载体(siderophore)的产生 | 第50页 |
| ·tatB和tatC基因与白叶枯病菌生物膜的形成无关 | 第50-51页 |
| ·tatB和tatC基因的突变改变细胞形态 | 第51页 |
| ·tatB和tatC基因突变后影响胞外多糖(EPS)的产生 | 第51页 |
| ·tatB和tatC基因对Xoo游动性和鞭毛形成很重要 | 第51-52页 |
| ·tatB和tatC突变体丧失趋化性 | 第52页 |
| ·tatB和tatC基因突变影响Xoo致病性,但不影响过敏性反应 | 第52-54页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第54页 |
| 3 讨论与结论 | 第54-57页 |
| ·Tat系统可能与胞外多糖产生相关 | 第55页 |
| ·Tat系统可能与水稻白叶枯病菌鞭毛形成,游动性和趋化性相关 | 第55页 |
| ·Tat系统与水稻白叶枯病菌致病性相关,但不影响过敏性反应 | 第55-57页 |
| 第二章 水稻条斑病菌tatC基因的克隆与功能验证 | 第57-73页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·试验所涉及的菌株、质粒和引物 | 第58-59页 |
| ·培养基及抗生素 | 第59页 |
| ·细菌基因组DNA、质粒的提取 | 第59页 |
| ·质粒的转化 | 第59页 |
| ·Southern杂交 | 第59页 |
| ·整合突变体的构建 | 第59页 |
| ·互补菌株的构建 | 第59页 |
| ·胞外纤维素酶的检测 | 第59页 |
| ·铁载体(siderophore)的检测 | 第59页 |
| ·生物膜的检测 | 第59页 |
| ·胞外多糖(EPS)的检测 | 第59页 |
| ·游动性和趋化应答试验 | 第59页 |
| ·细胞形态和鞭毛观察 | 第59页 |
| ·HR和致病性的测定 | 第59-60页 |
| ·总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第60页 |
| ·序列分析 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-70页 |
| ·tat和tatC基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·tat基因的序列分析 | 第61-63页 |
| ·tatC突变株的构建 | 第63-65页 |
| ·XTCM互补菌株的构建 | 第65页 |
| ·tatC基因的突变不影响Xooc正常生长 | 第65-66页 |
| ·tatC基因突变后不影响胞外维素酶的产生 | 第66页 |
| ·tatC基因突变后不影响细菌铁载体(siderophore)的产生 | 第66-67页 |
| ·tatC基因的突变不影响条斑病菌生物膜的形成 | 第67页 |
| ·tatC基因的突变改变细胞形态 | 第67-68页 |
| ·tatC基因突变后影响胞外多糖(EPS)的产生 | 第68页 |
| ·tatC基因对Xooc游动性和鞭毛形成很重要 | 第68-69页 |
| ·tatC突变体丧失趋化性 | 第69页 |
| ·tatC基因的突变影响Xooc致病性,但不影响过敏性反应 | 第69-70页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第70页 |
| 3 讨论与结论 | 第70-73页 |
| ·Tat系统可能与胞外多糖产生相关 | 第71页 |
| ·Tat系统可能与鞭毛形成,游动性和趋化性相关 | 第71页 |
| ·Tat系统与条斑病菌致病性相关,但对过敏性反应没有影响 | 第71-73页 |
| 第三章 水稻白叶枯病菌hisF基因的克隆及功能初析 | 第73-84页 |
| 1 材料和方法 | 第74-76页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第74页 |
| ·培养基及抗生素 | 第74页 |
| ·细菌基因组DNA、质粒的提取 | 第74-75页 |
| ·酶切、连接 | 第75页 |
| ·质粒的转化 | 第75-76页 |
| ·Southern杂交 | 第76页 |
| ·整合突变体的构建 | 第76页 |
| ·互补菌株的构建 | 第76页 |
| ·突变体在MMX中的生长情况测定 | 第76页 |
| ·HR和致病性的测定 | 第76页 |
| ·序列分析 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-83页 |
| ·hisF基因的克隆 | 第76-77页 |
| ·hisF基因的序列分析 | 第77-79页 |
| ·hisF突变株的构建 | 第79-81页 |
| ·HFM互补菌株的构建 | 第81页 |
| ·hisF基因的突变影响细菌的正常生长 | 第81-82页 |
| ·hisF基因突变不影响细菌致病性 | 第82-83页 |
| ·hisF基因与胞外纤维素酶的关系 | 第83页 |
| 3 讨论与结论 | 第83-84页 |
| 下一步工作设想 | 第84-85页 |
| 附录一 | 第85-86页 |
| 附录二 | 第86-88页 |
| 附录三 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
