| 致谢 | 第1-6页 |
| 前言 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-39页 |
| 1.蛋白酶抑制剂的概况 | 第16-28页 |
| ·蛋白酶抑制剂的分类 | 第16-19页 |
| ·蛋白酶抑制剂的结构特征 | 第19-23页 |
| ·蛋白酶抑制剂的作用机理 | 第23-27页 |
| ·蛋白酶抑制剂的生理功能 | 第27页 |
| ·Kazal型蛋白酶抑制剂 | 第27-28页 |
| 2.生殖的概述 | 第28-32页 |
| ·与生殖相关的精子蛋白 | 第29-31页 |
| ·与生殖相关的蛋白酶抑制剂 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-39页 |
| 第二部分 研究内容 | 第39-106页 |
| 第一章 罗氏沼虾雄性生殖系统相关的Kazal型蛋白酶抑制剂(MRPINK)及其突变体的体外表达 | 第40-60页 |
| 1.引言 | 第40-41页 |
| 2.材料 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| 3.方法 | 第42-52页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统总RNA的抽提 | 第42页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统cDNA的合成 | 第42-43页 |
| ·MRPINK成熟肽的体外表达 | 第43-47页 |
| ·MRPINK 两个结构域(domain1,domain2)的体外表达 | 第47-50页 |
| ·MRPINK P1位点突变体的体外表达 | 第50-52页 |
| 4.结果 | 第52-56页 |
| ·pET-28a(+)/MRPINK的原核表达 | 第52-53页 |
| ·pET-32a(+)/domain1,domain2的原核表达 | 第53-55页 |
| ·MRPINK突变体的原核表达 | 第55-56页 |
| 5.讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 第二章 MRPINK的抑制特征和结构对活性的影响 | 第60-70页 |
| 1.引言 | 第60-61页 |
| 2.材料 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| 3.方法 | 第61-63页 |
| ·表达产物的复性 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白的浓度检测 | 第62页 |
| ·重组蛋白的活性分析 | 第62-63页 |
| 4.结果 | 第63-66页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第63-64页 |
| ·rMRPINK的抑制活性 | 第64页 |
| ·rMRPINK对Chymotrypsin的抑制机理 | 第64-65页 |
| ·rMRPINK domain1和domain2的抑制活性 | 第65-66页 |
| ·MRPINK几个突变体的抑制活性 | 第66页 |
| 5.讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第三章 雄性生殖系统相关的Kazal型蛋白酶抑制剂(MRPINK)对罗氏沼虾精子活性的影响 | 第70-82页 |
| 1.引言 | 第70-71页 |
| 2.材料 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| 3.方法 | 第71-73页 |
| ·罗氏沼虾精子的准备 | 第72页 |
| ·罗氏沼虾卵膜提取物的准备 | 第72页 |
| ·精子提取物对卵膜蛋白的水解作用 | 第72页 |
| ·明胶薄层分析(Gelatin substrate film assay) | 第72-73页 |
| ·明胶-SDS-PAGE | 第73页 |
| ·MRPINK在精子上的免疫荧光定位 | 第73页 |
| 4.结果 | 第73-76页 |
| ·精子提取物对卵膜蛋白的水解作用及MRPINK对其的抑制作用 | 第73-74页 |
| ·MRPINK对精子明胶水解活性的抑制作用 | 第74-75页 |
| ·MRPINK对精子蛋白中类明胶酶的抑制作用 | 第75-76页 |
| ·MRPINK在精子上的作用位点 | 第76页 |
| 5.讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 第四章 罗氏沼虾精子类明胶酶(MSG,M.rosenbergii sperm gelatinase)的分离纯化,分子克隆和表达特征研究 | 第82-104页 |
| 1.引言 | 第82页 |
| 2.材料 | 第82-83页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器 | 第83页 |
| 3.方法 | 第83-95页 |
| ·MSG的分离纯化和氨基末端氨基酸序列分析 | 第83-84页 |
| ·MSG cDNA的分子克隆 | 第84-88页 |
| ·Northern blotting | 第88-90页 |
| ·原位杂交(ISH,In Situ Hybridization) | 第90-95页 |
| 4.结果 | 第95-101页 |
| ·MSG的分离纯化 | 第95-96页 |
| ·MSG基因的克隆 | 第96-98页 |
| ·MSG基因的组织表达特异性 | 第98页 |
| ·MSG基因的组织定位 | 第98-101页 |
| 5.讨论 | 第101页 |
| 参考文献 | 第101-104页 |
| 第五章 结论与展望 | 第104-106页 |
| 1.结论 | 第104页 |
| 2.有待进一步开展的工作 | 第104-106页 |
| 第三部分 本研究的创新点 | 第106-108页 |
| 本研究的创新点 | 第107-108页 |
| 附录 常用试剂配制一览表 | 第108-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
