| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 1.前言 | 第12-37页 |
| 1 黄曲霉毒素简介 | 第12-15页 |
| ·黄曲霉毒素的化学结构 | 第12-13页 |
| ·黄曲霉毒素的生物合成 | 第13页 |
| ·黄曲霉毒素的危害 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素去毒化的研究进展 | 第14-15页 |
| 2.绿色荧光蛋白简介 | 第15-22页 |
| ·绿色荧光蛋白的特性及发光机制 | 第16-19页 |
| ·绿色荧光蛋白在生物技术中的应用 | 第19-20页 |
| ·绿色荧光蛋白的研究现状与展望 | 第20-21页 |
| ·实验中涉及的蛋白折叠报告体系—proGFP Plasmid | 第21-22页 |
| 3.标记随机引物PCR(tagged random primers:T-PCR) | 第22-23页 |
| 4.定点突变(site-directed muagenesis)简述 | 第23-26页 |
| ·寡核有酸引物介导的定点突变 | 第24页 |
| ·PCR介导的定点突变 | 第24-26页 |
| 5.蛋白质工程 | 第26-28页 |
| ·研究的核心内容 | 第26-28页 |
| ·蛋白质结构分析 | 第26-27页 |
| ·结构、功能的设计和预测 | 第27页 |
| ·创造和改造 | 第27-28页 |
| 6.生物信息学简述 | 第28-34页 |
| ·生物信息学产生背景 | 第28页 |
| ·生物信息学数据库 | 第28-30页 |
| ·生物信息学的研究内容 | 第30-31页 |
| ·生物信息学的研究方法 | 第31-32页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第32-34页 |
| 7.背景及思路 | 第34-36页 |
| 8.研究方案 | 第36-37页 |
| 第一部分 通过蛋白折叠报告体系proGFP筛选ADTZ可溶性片段 | 第37-82页 |
| 第二章 实验设备及材料 | 第37-41页 |
| ·主要实验仪器 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-41页 |
| ·菌种及载体 | 第37页 |
| ·酶类 | 第37页 |
| ·试剂合 | 第37-38页 |
| ·常用试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试剂与母液配置 | 第38-41页 |
| 第三章 实验方法 | 第41-67页 |
| ·重叠延伸法对ADTZ进行定点突变改造 | 第41-48页 |
| ·重叠延伸法对ADTZ进行定点突变改造的引物设计 | 第41-42页 |
| ·ADTZ Mutant的制备 | 第42-45页 |
| ·ADTZ Mutant片段的T克隆 | 第45-47页 |
| ·重组pMD-19 ADTZ Mutant Plasmid的鉴定 | 第47-48页 |
| ·通过蛋白折叠报告体系proGFP筛选可溶性片段 | 第48-62页 |
| ·蛋白折叠报告体系—proGFP Plasmid | 第48-50页 |
| ·标记随机引物PCR(tagged random primers:T-PCR) | 第50-51页 |
| ·通过蛋白折叠报告体系proGFP筛选可溶性片段的流程及原理 | 第51-55页 |
| ·proGFP载体片段的制备 | 第55-57页 |
| ·标记随机引物PCR获取小片段 | 第57-61页 |
| ·去磷酸化的proGFP载体片段与截短型ADTZ片段Step C的连接 | 第61-62页 |
| ·截短型ADTZ蛋白与GFP蛋白融合表达的鉴定 | 第62-67页 |
| ·截短型ADTZ蛋白与GFP蛋白的融合表达 | 第62-63页 |
| ·超声波破碎法提取总蛋白 | 第63页 |
| ·总蛋白透析除盐 | 第63页 |
| ·总蛋白的浓缩 | 第63页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第63-64页 |
| ·PAGE活性电泳鉴定荧光融合蛋白 | 第64-65页 |
| ·镍亲和层析纯化荧光融合蛋白 | 第65-67页 |
| 第四章 实验结果 | 第67-82页 |
| ·重叠延伸法对ADTZ进行定点突变改造的结果 | 第67-72页 |
| ·ADTZ-AB、ADTZ-CD和ADTZ-EF突变片段的电泳检测 | 第67页 |
| ·回收ADTZ-AB、ADTZ-CD和ADTZ-EF PCR产物的电泳检测 | 第67-68页 |
| ·重叠延伸PCR合成全长ADTZ Mutant的电泳检测 | 第68页 |
| ·切胶回收突变产物ADTZ Mutant的电泳检测 | 第68-69页 |
| ·再次扩增突变产物ADTZ Mutant的电泳检测 | 第69页 |
| ·再次切胶回收突变产物ADTZ Mutant的电泳检测 | 第69-70页 |
| ·T载体平板结果(DH5α-PMD19 ADTZ Mutant Plasmid) | 第70页 |
| ·重组pMD-19 ADTZ Mutant Plasmid的鉴定的电泳结果 | 第70-71页 |
| ·PMD19-ADTZ Mutant的测序结果 | 第71-72页 |
| ·proGFP载体片段的制备的结果 | 第72-74页 |
| ·酶切鉴定proGFP质粒的电泳结果 | 第72-73页 |
| ·HindⅢ单酶切制备proGFP载体片段的电泳结果 | 第73页 |
| ·proGFP-HindⅢ产物的去磷酸化的电泳结果 | 第73页 |
| ·检测proGFP载体片段去磷酸化效果的转化实验结果 | 第73-74页 |
| ·标记随机引物PCR获取截短型ADTZ片段的结果 | 第74-76页 |
| ·T—PCR获取截短型ADTZ片段Step B的电泳检测结果 | 第74-75页 |
| ·再次扩增截短型ADTZ片段的电泳检测结果 | 第75页 |
| ·回收酶切后的截短型ADTZ片段Step C的电泳检测结果 | 第75-76页 |
| ·截短型ADTZ片段的可溶性筛选结果 | 第76-78页 |
| ·去磷酸化的proGFP载体片段与截短型ADTZ片段Step C的连接转化结果 | 第76-77页 |
| ·PCR快速鉴定筛选阳性克隆的结果 | 第77-78页 |
| ·阳性克隆的测序鉴定结果分析 | 第78页 |
| ·截短型ADTZ蛋白与GFP蛋白融合表达的结果 | 第78-82页 |
| ·对蛋白融合表达进行荧光检验的结果 | 第78-79页 |
| ·冻干浓缩后融合蛋白荧光检验的结果 | 第79页 |
| ·冻干浓缩后融合蛋白浓度检验的结果 | 第79页 |
| ·GFP融合蛋白活性电泳检验的结果 | 第79-80页 |
| ·GFP融合蛋白镍亲和层析纯化结果 | 第80-82页 |
| 第二部分 ADTZ结构生物学与功能生物学分析 | 第82-115页 |
| 第五章 ADTZ生物信息学分析 | 第82-107页 |
| ·ADTZ常规生物信息学分析 | 第82-89页 |
| ·基于组成的ADTZ辨识 | 第82-84页 |
| ·ADTZ疏水性分析 | 第84-85页 |
| ·ADTZ酶与非酶及酶的分类的分析 | 第85页 |
| ·蛋白质超家族分析 | 第85页 |
| ·亚细胞定位 | 第85-86页 |
| ·信号肽预测 | 第86页 |
| ·ADTZ跨膜区分析 | 第86-87页 |
| ·ADTZ蛋白可溶性分析 | 第87页 |
| ·ADTZ磷酸化位点分析 | 第87页 |
| ·PROSITE对ADTZ蛋白功能性质的分析 | 第87-89页 |
| ·ADTZ相关结构与功能的信息学分析 | 第89-107页 |
| ·二级结构分析 | 第89-90页 |
| ·ADTZ的二硫键的预测 | 第90-92页 |
| ·ADTZ二级结构组成的预测 | 第92页 |
| ·预测ADTZ氨基酸序列中的螺旋行为以及α碳氢原子构象变化 | 第92-95页 |
| ·AGADIR算法对ADTZ螺旋行为的稳定性进行预测评价比较 | 第95-98页 |
| ·ADTZ折叠区预测 | 第98-99页 |
| ·ADTZ未折叠区预测 | 第99页 |
| ·使用DisEMBL工具对ADTZ的混乱/非结构区域进行预测 | 第99-101页 |
| ·使用GlobPlot工具对ADTZ的球状结构区域进行预测 | 第101-102页 |
| ·ADTZ基序(Motif)和结构域(Domain)的预测分析 | 第102-107页 |
| 第六章 讨论 | 第107-114页 |
| ·应用重叠引物PCR技术去除ADTZ片段的HindlII位点 | 第107页 |
| ·应用proGFP筛选可溶性片段 | 第107-108页 |
| ·使用T-PCR技术扩增随机片段 | 第108-109页 |
| ·可溶性片段的筛选效率 | 第109页 |
| ·对于ADTZ结构信息学与功能信息学的分析 | 第109-111页 |
| ·筛选实验与预测分析的综合比较 | 第111-114页 |
| 第七章 小结和展望 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-120页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及获奖情况 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
