| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-26页 |
| ·Ras超家族蛋白 | 第13-14页 |
| ·Rho家族蛋白 | 第14-23页 |
| ·哺乳动物Rho族蛋白 | 第15-16页 |
| ·植物Rho族蛋白 | 第16-19页 |
| ·真菌中的Rho蛋白 | 第19-23页 |
| ·稻瘟病菌生长发育及侵染致病的信号途径 | 第23-26页 |
| 2 稻瘟病菌Rho族蛋白分析 | 第26-39页 |
| ·材料和方法 | 第26-30页 |
| ·蛋白序列获得、分析及系统深化关系分析 | 第26-27页 |
| ·蛋白序列同源性搜索比较及其系统演化关系分析 | 第26-27页 |
| ·蛋白结构域的分析 | 第27页 |
| ·稻瘟病菌Rho族蛋白的表达 | 第27-30页 |
| ·菌株材料 | 第27页 |
| ·稻瘟菌菌丝体、孢子、芽管以及附着胞获得 | 第27页 |
| ·总RNA提取及检测 | 第27-29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·反转录 | 第29-30页 |
| ·PCR | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-37页 |
| ·稻瘟菌基因组Rho族蛋白编码基因分析 | 第30-32页 |
| ·真菌Rho族蛋白的系统演化关系 | 第32-34页 |
| ·Rho族蛋白在稻瘟菌不同生长发育阶段的表达分析 | 第34页 |
| ·稻瘟病菌中Rho蛋白关系初探 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 3 稻瘟病菌MgCdc42功能分析 | 第39-77页 |
| ·材料与方法 | 第39-47页 |
| ·供试菌株 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·Southern杂交 | 第40-42页 |
| ·DNA转印 | 第40页 |
| ·探针的扩增 | 第40-41页 |
| ·探针的标记 | 第41页 |
| ·杂交及检测 | 第41-42页 |
| ·稻瘟菌菌丝体、孢子、芽管、附着胞获得及total RNA的提取 | 第42页 |
| ·Nothern杂交 | 第42-43页 |
| ·RNA凝胶电泳 | 第42页 |
| ·RNA转印及固定 | 第42页 |
| ·杂交探针的准备 | 第42页 |
| ·探针的标记 | 第42-43页 |
| ·杂交与检测 | 第43页 |
| ·MgCdc42突变体的构建 | 第43-45页 |
| ·Cdc42打断质粒p113-hph的构建 | 第43页 |
| ·MgCdc42互补载体的构建 | 第43页 |
| ·MgCdc42显性突变体的载体构建 | 第43-44页 |
| ·MgCdc42过量表达突变体的载体构建 | 第44-45页 |
| ·稻瘟病菌原生质体制备和转化 | 第45-46页 |
| ·细胞形态观察 | 第46页 |
| ·孢子萌发及附着胞形成实验 | 第46页 |
| ·洋葱表皮内侵染结构的观察 | 第46-47页 |
| ·大麦接种实验 | 第47页 |
| ·致病性鉴定 | 第47页 |
| ·稻叶组织侵染实验 | 第47页 |
| ·引物 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-74页 |
| ·稻瘟病菌Cdc42蛋白序列分析 | 第47-48页 |
| ·Cdc42在稻瘟病菌中是单挎贝基因,在分生孢子中表达量最高,且可能有两种剪切方式 | 第48-50页 |
| ·MgCdc42插入失活突变体的筛选 | 第50-51页 |
| ·MgCdc42插入失活导致稻瘟病菌致病性丧失 | 第51-53页 |
| ·无法产生侵入栓是稻瘟病菌MgCdc42插入失活突变体致病性丧失 | 第53-56页 |
| ·稻瘟病菌插入失活突变体导致附着胞形成受抑 | 第56-57页 |
| ·MgCdc42失活影响了稻瘟病菌的营养生长、产孢,且丧失了交配能力 | 第57-62页 |
| ·稻瘟病菌MgCdc42 Ectopic菌株生长发育及致病性情况 | 第62-63页 |
| ·转化野生型MgrCdc42至△Mgcdc42-1,恢复了zJMgcdc42-1的正常生长发育及致病性 | 第63-64页 |
| ·MgCdc42显性突变影响了稻瘟病菌的生长发育及致病性 | 第64-70页 |
| ·MgCdc42过量表达对稻瘟病菌生长发育及侵染致病无显著影响 | 第70-74页 |
| ·小结与讨论 | 第74-77页 |
| 4 稻瘟病菌MgRho3功能分析 | 第77-96页 |
| ·材料与方法 | 第77-79页 |
| ·供试菌株 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第77页 |
| ·Southern杂交 | 第77页 |
| ·DNA转印 | 第77页 |
| ·探针的扩增 | 第77页 |
| ·探针的标记 | 第77页 |
| ·杂交及检测 | 第77页 |
| ·稻瘟菌菌丝体、孢子、芽管、附着胞获得,total RNA的提取以及RT-PCR | 第77页 |
| ·MgRho3突变体的构建 | 第77-79页 |
| ·MgRho3插入失活突变体载体的构建 | 第77-78页 |
| ·MgrRho3互补载体的构建 | 第78页 |
| ·MgRho3过量表达突变体的载体构建 | 第78-79页 |
| ·稻瘟病菌原生质体制备和转化 | 第79页 |
| ·细胞形态观察 | 第79页 |
| ·孢子萌发及附着胞形成实验 | 第79页 |
| ·洋葱表皮内侵染结构的观察 | 第79页 |
| ·大麦接种实验 | 第79页 |
| ·致病性鉴定 | 第79页 |
| ·引物 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-93页 |
| ·稻瘟病菌MgRho3基因克隆 | 第79-80页 |
| ·MgRho3在稻瘟病菌不同阶段的表达动态 | 第80-81页 |
| ·MgRho3插入失活突变体以及过量表达突变体的筛选 | 第81-82页 |
| ·MgRho3插入失活导致了稻瘟病菌致病能力下降,而过量表达MgRho3导致稻瘟病菌致病性显著提高 | 第82-84页 |
| ·MgRho3插入失活导致稻瘟病菌附着胞形成受抑,而过量表达导致其产生具侵入能力的双附着胞 | 第84-87页 |
| ·稻瘟病菌MgRho3插入失活导致了分生孢子萌发延迟、附着胞形成滞后并减少；与之相反,MgRho3过量表达突变体附着胞形成提早 | 第87-89页 |
| ·MgRho3插入失活导致了稻瘟病菌菌丝生长、产孢异常 | 第89-93页 |
| ·MgRho3互补菌株的筛选及其观察 | 第93页 |
| ·小结与讨论 | 第93-96页 |
| 5 稻瘟病菌MgRho3与MgCdc42关系初探 | 第96-109页 |
| ·材料与方法 | 第96-97页 |
| ·供试菌株 | 第96页 |
| ·培养基 | 第96页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第96页 |
| ·稻瘟菌菌丝体total RNA的提取以及RT-PCR | 第96页 |
| ·MgRho3/MgCdc42双突变体筛选 | 第96-97页 |
| ·MgrRho3插入失活突变体中过量表达MgCdc42 | 第96-97页 |
| ·MgCdc42插入失活突变体中过量表达MgRho3 | 第97页 |
| ·细胞形态观察 | 第97页 |
| ·孢子萌发及附着胞形成实验 | 第97页 |
| ·洋葱表皮内侵染结构的观察 | 第97页 |
| ·致病性鉴定 | 第97页 |
| ·结果与分析 | 第97-107页 |
| ·MgCdc42与MgRho3表达关系初探 | 第97-98页 |
| ·MgRho3插入失活突变体中过量表达MgCdc42 | 第98-101页 |
| ·MgCdc42插入失活突变体中过量表达MgRho3 | 第101-107页 |
| ·小结与讨论 | 第107-109页 |
| 6 稻瘟病菌MgCdc42互作蛋白初探 | 第109-117页 |
| ·材料和方法 | 第109-112页 |
| ·蛋白序列同源性搜索 | 第109页 |
| ·稻瘟菌Rho族蛋白编码基因的表达分析 | 第109-110页 |
| ·蛋白互作分析 | 第110-112页 |
| ·转化载体的构建 | 第110-111页 |
| ·酵母转化 | 第111-112页 |
| ·结果与分析 | 第112-115页 |
| ·稻瘟菌Cdc42互作同源蛋白搜索 | 第112-113页 |
| ·稻瘟菌MgCdc42互作蛋白表达分析 | 第113-114页 |
| ·MgCdc42与Chm1互作分析 | 第114-115页 |
| ·小结与讨论 | 第115-117页 |
| 7 总结 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-130页 |
| 附录1 | 第130-131页 |
| 附录2 | 第131-132页 |
| 附录3 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
