| 独创性声明 | 第1页 |
| 论文使用授权的说明 | 第3-8页 |
| 缩写词 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-26页 |
| 一 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 白藜芦醇概述 | 第14-18页 |
| ·白藜芦醇的发现、性质和结构 | 第14-15页 |
| ·白藜芦醇的药理作用 | 第15-17页 |
| ·植物中的白藜芦醇及其生物合成 | 第17-18页 |
| 2 芪合酶基因研究进展 | 第18-21页 |
| ·芪合酶基因的结构和功能 | 第18-19页 |
| ·芪合酶基因工程研究进展 | 第19-21页 |
| 3 甜瓜基因工程研究进展 | 第21-24页 |
| ·甜瓜组织培养研究进展 | 第21-22页 |
| ·甜瓜转基因进展 | 第22-24页 |
| 二 研究工作的意义 | 第24页 |
| 三 研究内容 | 第24-25页 |
| 四 技术路线 | 第25-26页 |
| 第一章 植物中白藜芦醇含量的测定 | 第26-30页 |
| 1 试验仪器、试剂和材料 | 第26-27页 |
| ·供试植物材料 | 第26页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第26-27页 |
| 2 测定方法 | 第27页 |
| ·供试样品的制备 | 第27页 |
| ·色普分离条件 | 第27页 |
| ·标准曲线和最小检测限 | 第27页 |
| ·样品中白藜芦醇的测定 | 第27页 |
| 3 测定结果与分析 | 第27-30页 |
| ·高效液相色谱图谱分析 | 第27-28页 |
| ·虎杖及部分果实中白藜芦醇的含量 | 第28-30页 |
| 第二章 虎杖芪合酶基因的克隆 | 第30-44页 |
| 1 试验材料 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·试剂盒、酶和Marker | 第30-31页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第31页 |
| 2 试验方法 | 第31-38页 |
| ·虎杖基因组嫩茎DNA的提取、电泳和紫外分析测定 | 第31-32页 |
| ·虎杖嫩茎基因组DNA的提取步骤 | 第31页 |
| ·电泳分析和紫外分光光度测定 | 第31-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32页 |
| ·虎杖芪合酶基因保守区的克隆 | 第32-35页 |
| ·虎杖芪合酶基因保守区的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·目的片段的回收 | 第33页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化、筛选、重组质粒的PCR检测与测序 | 第34-35页 |
| ·虎杖芪合酶基因3′端和5′端序列的克隆 | 第35-38页 |
| ·虎杖芪合酶基因组DNA的酶切 | 第35-36页 |
| ·酶切片段与接头的连接反应 | 第36-37页 |
| ·虎杖芪合酶基因3′端和5′端序列的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR产物的回收、连接、转化、重组质粒的PCR检测与测序 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-44页 |
| ·虎杖嫩茎基因组DNA的不同提取方法的比较 | 第38-39页 |
| ·虎杖芪合酶基因的克隆与序列分析 | 第39-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 羊蹄甲果荚芪合酶cDNA全长的克隆 | 第44-56页 |
| 1 试验材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·试剂盒、酶和Marker | 第44页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第44-45页 |
| ·试验用具与耗材 | 第45页 |
| 2 试验方法 | 第45-50页 |
| ·羊蹄甲果英总RNA的提取与检测 | 第45-46页 |
| ·羊蹄甲果荚总RNA的提取步骤 | 第45页 |
| ·电泳分析和紫外分光光度测定 | 第45-46页 |
| ·羊蹄甲果英芪合酶保守区cDNA的克隆 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·羊蹄甲果荚芪合酶保守区cDNA的RT-PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化和蓝白斑筛选 | 第47页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第47页 |
| ·羊蹄甲芪合酶eDNA全长的克隆 | 第47-50页 |
| ·引物设计及合成 | 第48页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第48-49页 |
| ·cDNA末端的快速扩增 | 第49页 |
| ·目的片段的回收、连接、转化和蓝白斑筛选 | 第49页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-56页 |
| ·羊蹄甲果英总RNA的提取结果 | 第50-51页 |
| ·羊蹄甲果荚芪合酶保守区cDNA的PCR扩增与序列分析 | 第51-52页 |
| ·羊蹄甲果荚芪合酶cDNA的RACE与序列分析 | 第52-54页 |
| ·羊蹄甲果荚芪合酶cDNA全长的获得与序列分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 芪合酶基因对甜瓜的遗传转化 | 第56-71页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56-57页 |
| ·工具酶、生化试剂和试剂盒 | 第56页 |
| ·培养基、抗生素及生长调节剂 | 第56-57页 |
| ·载体及菌株 | 第57页 |
| 2 试验方法 | 第57-64页 |
| ·甜瓜遗传转化体系的建立 | 第57-58页 |
| ·无菌苗的获得 | 第57页 |
| ·不定芽的诱导 | 第57页 |
| ·不定芽的伸长与生根培养 | 第57页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第57-58页 |
| ·芪合酶基因植物表达载体的构建 | 第58-61页 |
| ·羊蹄甲芪合酶基因全长的获得 | 第58-59页 |
| ·质粒的提取 | 第59-60页 |
| ·质粒的酶切 | 第60页 |
| ·连接 | 第60-61页 |
| ·连接产物的转化、筛选及重组质粒鉴定 | 第61页 |
| ·芪合酶基因对甜瓜的遗传转化 | 第61-62页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及重组质粒对农杆菌的转化 | 第61页 |
| ·转化用外植体的准备 | 第61页 |
| ·侵染用工程菌液的准备 | 第61-62页 |
| ·农杆菌的侵染 | 第62页 |
| ·转基因植株的获得 | 第62页 |
| ·转基因植株的检测 | 第62-64页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·转基因植株中自藜芦醇含量的测定 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-71页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第64-67页 |
| ·生长调节剂对不定芽分化的影响 | 第64-65页 |
| ·子叶生长天数对不定芽诱导的影响 | 第65页 |
| ·培养基成分对苗生长的影响 | 第65-66页 |
| ·生长调节剂对试管苗生根的影响 | 第66页 |
| ·抗生素对植株再生的影响 | 第66-67页 |
| ·芪合酶基因植物表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·转基因植株的检测 | 第68-70页 |
| ·转基因植株的PCR检测结果 | 第68-69页 |
| ·转基因植株中白藜芦醇含量的测定结果 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录1 | 第78-79页 |
| 附录2 | 第79页 |
| 附录3 | 第79-80页 |
| 附录4 | 第80-82页 |
| 附录5 | 第82-84页 |
| 附录6 | 第84-85页 |
| 附录7 | 第85页 |
| 附录8 | 第85-86页 |
| 附录9 | 第86-87页 |
| 附录10 | 第87-88页 |
| 附录11 | 第88-89页 |
| 附录12 | 第89-90页 |
| 博士在读期间发表的学术论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
