| 独创声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| ·禽流感病毒的生物学 | 第11-16页 |
| ·禽流感病毒 | 第11页 |
| ·禽流感病毒的形态特征 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒的理化、培养特性 | 第12页 |
| ·禽流感病毒致病力的划分 | 第12-13页 |
| ·病毒的抗原性变异 | 第13-14页 |
| ·AIV的HA、M、NP蛋白 | 第14-16页 |
| ·本研究目的与意义 | 第16-18页 |
| ·表达一种优良的H5亚型AIV的检测抗原 | 第16-17页 |
| ·表达一种优良的A型流感病毒的检测抗原 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·质粒与菌株 | 第18页 |
| ·扩增引物 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·参考毒株 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-29页 |
| ·AIV目的基因的扩增 | 第20-21页 |
| ·M1、NP、HA、HA1基因克隆载体的构建 | 第21-22页 |
| ·M1、NP基因原核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·M1基因的原核表达 | 第23-25页 |
| ·NP基因的原核表达 | 第25-26页 |
| ·HA、HA1基因在昆虫细胞Sf9中的表达 | 第26-28页 |
| ·M1、NP、HA蛋白的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-43页 |
| ·AIV目的基因的PCR扩增 | 第29页 |
| ·M1、NP、HA、HA1基因克隆载体的构建 | 第29-31页 |
| ·pMD-AIV-M1的鉴定 | 第29-30页 |
| ·pMD-AIV-NP的鉴定 | 第30页 |
| ·pMD-AIV-HA的鉴定 | 第30-31页 |
| ·pMD-AIV-HA1的鉴定 | 第31页 |
| ·M1、NP基因原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pET-AIV-M1的鉴定 | 第31页 |
| ·pET-AIV-NP的鉴定 | 第31-32页 |
| ·M1基因的原核表达 | 第32-33页 |
| ·M1基因原核表达产物SDS-PAGE分析 | 第32页 |
| ·M1的纯化及Western-Blotting分析 | 第32-33页 |
| ·M1纯化产物的Dot-ELISA分析 | 第33页 |
| ·NP基因的原核表达 | 第33-35页 |
| ·NP在BL21(DE3)pLysS中表达产物的SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| ·NP在Rosetta(DE3)pLysS中表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| ·NP的Western-Blotting分析 | 第34-35页 |
| ·Sf9昆虫细胞的正常、蚀斑及病变的形态区别 | 第35-36页 |
| ·HA、HA1在昆虫细胞Sf9中的表达 | 第36-39页 |
| ·HA重组病毒的鉴定 | 第36页 |
| ·HA1重组病毒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·HA、HA1的SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·HA、HA1产物的Western-Blotting分析 | 第37-38页 |
| ·HA1表达产物的Dot-ELISA分析 | 第38-39页 |
| ·HA、M1、NP蛋白的生物信息学分析 | 第39-43页 |
| ·M1分子结构的分析 | 第39-40页 |
| ·NP蛋白分子结构分析 | 第40页 |
| ·H1～H15亚型AIV HA1、HA2氨基酸序列比较 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| ·M1是否可以作为A型流感病毒的检测抗原 | 第43页 |
| ·关于M1蛋白的纯化及纯化产物不可溶性的分析 | 第43-44页 |
| ·外源基因结构对表达的影响 | 第44-45页 |
| ·HA和HA1抗原性的比较 | 第45页 |
| ·本试验选用杆状病毒-昆虫细胞系统的优缺点 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
