| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-29页 |
| ·文库构建技术 | 第10-13页 |
| ·经典cDNA文库 | 第10页 |
| ·标准化cDNA文库 | 第10页 |
| ·差示cDNA文库 | 第10-11页 |
| ·抑制消减杂交文库 | 第11页 |
| ·酵母双杂交文库 | 第11-12页 |
| ·mRNA差异显示文库 | 第12页 |
| ·限制性cDNA文库 | 第12-13页 |
| ·染色体或区域特异性cDNA文库 | 第13页 |
| ·其它种类的cDNA文库 | 第13页 |
| ·酵母双杂交技术 | 第13-17页 |
| ·酵母双杂交技术的原理和应用 | 第13-14页 |
| ·双杂交系统的缺陷 | 第14-15页 |
| ·酵母双杂交体系的新发展 | 第15-17页 |
| ·猪呼吸道传染病的概况 | 第17-22页 |
| ·病原学 | 第17-18页 |
| ·流行病学 | 第18页 |
| ·毒力相关因子 | 第18-20页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的诊断方法 | 第20-22页 |
| ·常见的其它呼吸道疾病 | 第22-26页 |
| ·猪革斯氏病 | 第22-23页 |
| ·多杀巴氏杆菌病 | 第23-24页 |
| ·波氏杆菌病 | 第24-25页 |
| ·猪支原体肺炎 | 第25-26页 |
| ·胸膜肺炎与其它多种呼吸道疾病的混合感染 | 第26-29页 |
| ·呼吸道疾病日益突出 | 第26-27页 |
| ·多重感染或混合感染使病情复杂化 | 第27-29页 |
| 第2章 研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 第3章 猪肺巨噬细胞酵母双杂交标准化cDNA文库 | 第30-44页 |
| ·仪器与材料 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-38页 |
| ·巨噬细胞的分离与纯化 | 第30-31页 |
| ·巨噬细胞的鉴定 | 第31页 |
| ·RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·RNA质量的检测 | 第32-33页 |
| ·cDNA的合成 | 第33-34页 |
| ·cDNA的检测 | 第34页 |
| ·cDNA的均衡化(Normalization) | 第34-36页 |
| ·cDNA的纯化,回收 | 第36页 |
| ·cDNA的转化 | 第36-37页 |
| ·酵母文库的培养,回收 | 第37页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·巨噬细胞提取 | 第38页 |
| ·RNA质量检测 | 第38-39页 |
| ·cDNA合成与均衡化 | 第39-40页 |
| ·文库的培养和回收 | 第40页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第4章 胸膜肺炎放线杆菌apxⅢ诱饵质粒的构建及表达 | 第44-52页 |
| ·材料与仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·apxⅢ基因的克隆与诱饵质粒的构建 | 第44-46页 |
| ·apxⅢ诱饵基因的表达和转录活性分析 | 第46-48页 |
| ·实验结果 | 第48-50页 |
| ·apxⅢ基因的PCR扩增 | 第48页 |
| ·apxⅢ诱饵质粒的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·ApxⅢ诱饵蛋白SDS-PAGE分析和Western-blot | 第49-50页 |
| ·酵母双杂交体系的验证结果 | 第50页 |
| ·诱饵自激活实验 | 第50页 |
| ·诱饵毒性实验 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第5章 5种猪常见呼吸道疾病的多重PCR诊断方法的建立 | 第52-63页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·引物的设计 | 第52-53页 |
| ·细菌培养 | 第53页 |
| ·模板的制备 | 第53-54页 |
| ·单一目的基因的PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·多重PCR条件优化 | 第55页 |
| ·特异性检测 | 第55页 |
| ·敏感度检测 | 第55页 |
| ·小鼠感染实验和病料组织检测 | 第55页 |
| ·琼脂免疫扩散实验 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-61页 |
| ·单一目的基因的PCR扩增 | 第56页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第56页 |
| ·多重PCR条件优化 | 第56-58页 |
| ·特异性检测 | 第58-59页 |
| ·敏感度检测 | 第59页 |
| ·动物实验结果 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
