| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-17页 |
| 1 膜蛋白的研究意义 | 第13页 |
| 2 膜蛋白的研究现状 | 第13-14页 |
| 3 表皮蛋白的研究概述 | 第14-15页 |
| 4 以核型多角体病毒（NPV）为载体的昆虫表达系统 | 第15-16页 |
| ·原理 | 第15页 |
| ·转移载体质粒的构建——利用多角体蛋白基因启动子 | 第15-16页 |
| 5 研究展望 | 第16-17页 |
| 第二章 实验设计 | 第17-20页 |
| 1 实验目的和意义 | 第17页 |
| 2 研究内容 | 第17-18页 |
| 3 实验流程图 | 第18-20页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第20-25页 |
| 1 生物信息学工具 | 第20页 |
| 2 生物信息学分析结果 | 第20-24页 |
| ·基因的基本信息 | 第20-21页 |
| ·保守结构域 | 第21页 |
| ·疏水性分析 | 第21-22页 |
| ·跨膜分析 | 第22页 |
| ·信号肽分析 | 第22-23页 |
| ·蛋白质的同源性比较 | 第23页 |
| ·蛋白质的定位预测 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-25页 |
| 第四章 家蚕表皮膜蛋白基因N141 的克隆 | 第25-37页 |
| 1 材料与试剂 | 第25-27页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要试剂的配置 | 第25-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-33页 |
| ·pBacPAK8-Polh-N141 重组质粒构建策略 | 第27-31页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物试剂盒回收 | 第29页 |
| ·PCR 产物与载体pBacPAK8-Polh 双酶切 | 第29页 |
| ·胶回收酶切产物 | 第29-30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30-31页 |
| ·挑斑及质粒抽提 | 第31页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·pET-28a-Polh-N141 重组质粒构建策略 | 第31-33页 |
| ·双酶切重组质粒pBacPAK8-Polh-N141 及载体pET-28a | 第32页 |
| ·连接、转化 | 第32页 |
| ·挑斑、质粒抽提及鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-35页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第33页 |
| ·pBacPAK8-Polh-N141 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·pET-28a-Polh-N141 重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·序列测定 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第五章 融合蛋白的原核表达及纯化 | 第37-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| ·融合蛋白Polh-N141 的表达 | 第40-41页 |
| ·E.coli BL21 感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌BL21 表达菌株及鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第41-43页 |
| ·梯度pH 值的Tris·Cl 缓冲液洗涤纯化融合蛋白 | 第41页 |
| ·包涵体的溶解及镍柱纯化融合蛋白 | 第41-42页 |
| ·Millipore 除盐浓缩 | 第42页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的酶切 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·梯度pH 值的Tris·Cl 缓冲液洗涤纯化融合蛋白 | 第44-46页 |
| ·镍柱纯化融合蛋白 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白的酶切结果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 融合蛋白的真核表达 | 第50-64页 |
| 1 Bac-to-Bac 系统 | 第50-51页 |
| 2 Bac-to-Bac 系统重组外源基因表达的一般实验流程 | 第51-52页 |
| 3 材料及试剂 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52-53页 |
| ·主要试剂的配置 | 第53-54页 |
| 4 实验方法 | 第54-60页 |
| ·pFastBac-Polh-N141 重组质粒构建策略 | 第54-55页 |
| ·双酶切重组质粒pBacPAK8-Polh-N141 及载体pFastBac HTb | 第54页 |
| ·连接、转化 | 第54-55页 |
| ·挑斑、质粒抽提及鉴定 | 第55页 |
| ·Bacmid 重组质粒构建策略 | 第55-58页 |
| ·DH10Bac E.coli 感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
| ·重组质粒 pFastBac-Polh-N141 转化 DH10Bac E.coli 感受态细胞 | 第56页 |
| ·挑斑及抽提Bacmid 重组质粒 | 第56-57页 |
| ·Bacmid 重组质粒的PCR 鉴定 | 第57-58页 |
| ·Bacmid 重组质粒转染家蚕细胞BmN | 第58-59页 |
| ·发病细胞中融合蛋白表达的鉴定 | 第59-60页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定 | 第59页 |
| ·Western blotting 鉴定 | 第59-60页 |
| 5 结果 | 第60-63页 |
| ·pFastBac-Polh-N141 重组质粒的鉴定 | 第60-61页 |
| ·Bacmid 重组质粒的PCR 鉴定 | 第61页 |
| ·发病细胞病毒基因组的PCR 鉴定 | 第61-62页 |
| ·发病细胞中融合蛋白表达的SDS-PAGE 鉴定 | 第62页 |
| ·发病细胞中融合蛋白表达的Western blotting 鉴定 | 第62-63页 |
| 6 讨论 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
