| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 引 言 | 第9-26页 |
| 一、白血病抑制因子(LIF)的基因结构与调控 | 第9-11页 |
| (一) LIF 的基因及其一级结构 | 第9-10页 |
| (二) LIF 基因表达 | 第10-11页 |
| (三) LIF 蛋白的三级结构 | 第11页 |
| 二、 白血病抑制因子受体(LIFR)的基因及调控 | 第11-13页 |
| (一) LIFR 受体基因及结构 | 第11页 |
| (二) 膜结合形式的 LIFR | 第11-12页 |
| (三) 可溶形式 LIFR | 第12页 |
| (四) gp130 基因及其产物 | 第12页 |
| (五) LIFR-gp130 受体亚基复合体 | 第12-13页 |
| 三、LIF 的信号途径 | 第13-16页 |
| (一) Jak-STAT 途径 | 第13-14页 |
| (二) 胞质受体结构域 | 第14-15页 |
| (三) Jak-STAT 信号的负反馈调节因子 | 第15页 |
| (四) 有丝分裂原激活激活蛋白激酶途径 | 第15-16页 |
| 四、 白血病抑制因子(LIF)的功能 | 第16-23页 |
| (一) LIF 是造血和神经生发因子 | 第16-17页 |
| (二) LIF 与生殖及内分泌系统的关系 | 第17-19页 |
| (三) LIF 对胚胎干细胞的作用 | 第19-21页 |
| (四) LIF 在炎症中的作用 | 第21-22页 |
| (五) LIF 对骨代谢的作用 | 第22页 |
| (六) LIF 对能量代谢的作用 | 第22-23页 |
| (七) LIF 对肿瘤的内分泌应答作用 | 第23页 |
| 五、猪 LIF 及猪胚干细胞(ES 和 EG)的国内外研究进展 | 第23-25页 |
| 六、本文的选题依据及研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 第一章 材料与方法 | 第26-35页 |
| 一、 实验材料 | 第26-27页 |
| (一) 实验动物 | 第26页 |
| (二) 实验仪器 | 第26页 |
| (三) 主要试剂 | 第26-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-35页 |
| (一) 猪脾总 RNA 的提取 | 第27页 |
| (二) 质粒构建 | 第27-30页 |
| (三) 重组pLIF 蛋白的原核表达 | 第30-31页 |
| (四) 重组蛋白的纯化和复性 | 第31-32页 |
| (五) 重组pLIF 蛋白的真核表达 | 第32页 |
| (六) Western Blotting | 第32-33页 |
| (七) 重组pLIF 蛋白的活性鉴定 | 第33页 |
| (八) 猪 LIF 多克隆抗体的制备 | 第33-34页 |
| (九) LIF 蛋白在猪体内的免疫定位 | 第34-35页 |
| 第二章 结果与分析 | 第35-43页 |
| 一、猪 LIFcDNA 的克隆 | 第35-38页 |
| (一) 猪脾脏总 RNA 的提取 | 第35页 |
| (二) RT-PCR | 第35页 |
| (三) 表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| (四) 质粒测序 | 第36-37页 |
| (五) 猪﹑人和小鼠LIF 蛋白氨基酸序列比较 | 第37-38页 |
| 二、重组猪 LIF 蛋白的表达 | 第38-40页 |
| (一) 重组猪 LIF 蛋白在大肠杆菌中的表达﹑纯化和复性 | 第38-39页 |
| (二) 重组猪 LIF 蛋白在 CHO 细胞中的表达 | 第39-40页 |
| 三、重组猪LIF 蛋白的活性鉴定 | 第40-41页 |
| 四、LIF 蛋白在猪体内的免疫定位 | 第41-43页 |
| 第三章 讨论 | 第43-45页 |
| 一、猪LIFcDNA的克隆 | 第43页 |
| 二、重组猪 LIF 蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 三、重组猪 LIF 蛋白的活性分析 | 第44页 |
| 四、 猪LIF蛋白多克隆抗体的制备与免疫定位 | 第44页 |
| 五、 克隆﹑表达重组猪 LIF 蛋白的意义 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读博士学位期间已发表的论文 | 第69-71页 |
