| 英文缩略表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 引言 | 第15-33页 |
| 1 IFN-γ理化特性及分子结构 | 第16-17页 |
| 2 IFN-γ信号传导的分子机制 | 第17-20页 |
| 3 IFN-γ产生及诱导剂 | 第20-21页 |
| 4 IFN-γ生物学活性及其作用机制 | 第21-25页 |
| ·抗病毒活性 | 第21-23页 |
| ·免疫调节活性 | 第23-24页 |
| ·抗肿瘤活性 | 第24-25页 |
| 5 IFN-γ的应用及发展前景 | 第25-31页 |
| ·在疾病诊断和免疫学检测方面的应用 | 第26-29页 |
| ·作为疫苗免疫佐剂的应用 | 第29-30页 |
| ·在临床治疗方面的应用 | 第30页 |
| ·提纯基因工程重组干扰素 | 第30-31页 |
| 6 研究目的和意义 | 第31-32页 |
| 7 研究内容和方法 | 第32-33页 |
| 试验部分 | 第33-80页 |
| 试验一牛、猪和鸡 IFN-γ的原核表达及特异性免疫血清的制备 | 第33-44页 |
| 1 材料和方法 | 第33-38页 |
| ·质粒与菌种 | 第33-34页 |
| ·扩增引物 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·含有牛、猪和鸡 IFN-γ基因原核表达质粒的构建与鉴定 | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌表达重组 IFN-γ蛋白及SDS-PAGE | 第36页 |
| ·重组IFN-γ蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| ·抗IFN-γ特异性高免血清的制备 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| ·PCR 扩增 IFN-γ目的基因 | 第38-39页 |
| ·pET-IFN-γ的酶切鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·原核表达重组 IFN-γ蛋白的鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接 ELISA 测定兔抗 IFN-γ特异性多克隆抗体效价 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 试验二牛、鸡和猪γ-干扰素在哺乳动物细胞中的瞬时表达及抗病毒活性的测定 | 第44-53页 |
| 1 材料和方法 | 第44-48页 |
| ·质粒、细胞系与菌种 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·重组真核表达质粒pCAGG-IFN-γ的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| ·转染 | 第46-47页 |
| ·间接IFA 检测IFN-γ表达 | 第47页 |
| ·间接ELISA 检测IFN-γ表达 | 第47页 |
| ·重组IFN-γ抗病毒活性测定 | 第47-48页 |
| 2 结果 | 第48-52页 |
| ·pCAGG-IFN-γ质粒的构建及鉴定 | 第48页 |
| ·间接 IFA 结果 | 第48-49页 |
| ·间接 ELISA 结果 | 第49-50页 |
| ·重组IFN-γ抗病毒活性测定 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 试验三牛、鸡和猪γ-干扰素在杆状病毒中表达及其抗病毒活性的测定 | 第53-70页 |
| 1 材料与方法 | 第54-60页 |
| ·质粒、受体菌、细胞系及其培养基 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·细菌培养基 | 第54页 |
| ·引物 | 第54-55页 |
| ·表达牛、鸡和猪γ-干扰素的重组杆状病毒的构建 | 第55-59页 |
| ·间接IFA 检测rBac-IFN-γ在昆虫细胞中的表达 | 第59页 |
| ·间接 ELISA 检测rBac-IFN-γ在昆虫细胞中的表达 | 第59-60页 |
| ·重组 IFN-γ抗病毒活性测定 | 第60页 |
| ·重组 IFN-γ抗病毒活性阻断试验 | 第60页 |
| 2 结果 | 第60-68页 |
| ·重组供体质粒pFBac-IFN-γ的构建及鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-IFN-γ的提取和鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组杆状病毒rBac-IFN-γ的 PCR 鉴定 | 第62-63页 |
| ·间接 IFA 检测 IFN-γ表达 | 第63-64页 |
| ·间接 ELISA 检测 IFN-γ表达 | 第64-65页 |
| ·重组 IFN-γ抗病毒活性测定 | 第65-67页 |
| ·重组 IFN-γ抗病毒活性阻断试验 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 试验四抗牛和猪γ-干扰素单克隆抗体的研制及鉴定 | 第70-80页 |
| 1 材料和方法 | 第70-75页 |
| ·免疫抗原、细胞系及其培养基 | 第70页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第70-71页 |
| ·动物免疫 | 第71页 |
| ·细胞融合 | 第71-72页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第72-73页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化、冻存和复苏 | 第73-74页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第74页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第74-75页 |
| 2 结果 | 第75-77页 |
| ·单克隆抗体的筛选与单克隆杂交瘤细胞株的建立 | 第75-76页 |
| ·单抗腹水效价的测定和亚型鉴定 | 第76页 |
| ·Western Blot 检测单克隆抗体特异性 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 附录 | 第93-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
