| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 文献综述 | 第14-45页 |
| 第一章 猪水疱病及猪水疱病病毒研究进展 | 第14-23页 |
| ·猪水疱病研究进展 | 第14-17页 |
| ·病原学 | 第14页 |
| ·猪水疱病的流行病学 | 第14-15页 |
| ·猪水疱病的临床症状和发病机理 | 第15-16页 |
| ·诊断 | 第16页 |
| ·猪水疱病的防控策略 | 第16-17页 |
| ·猪水疱病病毒研究进展 | 第17-20页 |
| ·猪水疱病病毒的形态及理化特性 | 第17页 |
| ·SVDV 基因组结构 | 第17-18页 |
| ·SVDV 编码的蛋白及其功能 | 第18-20页 |
| ·结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·非结构蛋白 | 第19-20页 |
| ·猪水疱病疫苗研究进展 | 第20-21页 |
| ·弱毒疫苗 | 第20页 |
| ·抗独特型抗体疫苗 | 第20-21页 |
| ·基因工程疫苗 | 第21页 |
| ·基因缺失毒力致弱疫苗 | 第21页 |
| ·亚单位疫苗 | 第21页 |
| ·基因工程活载体疫苗 | 第21页 |
| ·合成肽疫苗 | 第21页 |
| ·小结 | 第21-23页 |
| 第二章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展 | 第23-36页 |
| ·概述 | 第23-24页 |
| ·CSFV 的病原学及生物学特性 | 第24-26页 |
| ·CSFV 的病原学 | 第24-25页 |
| ·CSFV 病毒粒子结构 | 第24-25页 |
| ·CSFV 的理化特性 | 第25页 |
| ·CSFV 生物学特性研究进展 | 第25-26页 |
| ·抗原性 | 第25页 |
| ·病原性及病理特性 | 第25-26页 |
| ·遗传特性 | 第26页 |
| ·CSFV 致病机制的研究 | 第26-30页 |
| ·CSFV 的免疫病理学 | 第26-27页 |
| ·CSFV 在体内的复制过程 | 第27-29页 |
| ·猪瘟病毒对体外培养细胞的影响 | 第29-30页 |
| ·CSFV 的分子免疫学 | 第30-32页 |
| ·猪瘟防制策略与防制新技术的研究进展 | 第32-35页 |
| ·结束语 | 第35-36页 |
| 第三章 逆转录病毒载体系统的研究 | 第36-45页 |
| ·逆转录病毒表达系统 | 第36-39页 |
| ·逆转录病毒表达载体 | 第36-38页 |
| ·辅助病毒互补的逆转录病毒质粒载体 | 第36-37页 |
| ·不需要辅助病毒互补的逆转录病毒载体 | 第37页 |
| ·广寄主的逆转录病毒载体 | 第37页 |
| ·逆转录病毒表达载体 | 第37-38页 |
| ·包装细胞系 | 第38页 |
| ·水疱性口炎病毒载体 | 第38-39页 |
| ·逆转录病毒表达系统基本原理 | 第39-40页 |
| ·逆转录病毒载体的构建与应用 | 第40页 |
| ·影响逆转录病毒载体表达效率的影响因素 | 第40-41页 |
| ·逆转录病毒表达系统在基因治疗及表达研究中的应用 | 第41-43页 |
| ·逆转录病毒载体系统在基因治疗中的应用 | 第41-42页 |
| ·逆转录病毒载体在基因表达反面的应用 | 第42-43页 |
| ·逆转录病毒载体系统的缺陷 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 试验研究 | 第45-80页 |
| 第四章 猪水疱病亚单位标记疫苗的构建及体外表达 | 第45-55页 |
| ·材料与方法 | 第45-51页 |
| ·质粒载体、工程菌及主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·细胞及种毒 | 第46页 |
| ·引物的设计与合成 | 第46页 |
| ·目的基因的获取 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的构建、克隆及鉴定 | 第47-49页 |
| ·构建策略 | 第47页 |
| ·重组质粒的构建即克隆方法 | 第47-49页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态的制备 | 第47-48页 |
| ·PCR 产物及载体质粒的酶切、回收及连接 | 第48页 |
| ·连接产物的转化 | 第48页 |
| ·重组质粒的制备 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49页 |
| ·重组SCDV HK/70 P1 基因的逆转录病毒载体的构建 | 第49页 |
| ·重组质粒的测序 | 第49页 |
| ·体外转染质粒的制备 | 第49-50页 |
| ·转染包装细胞GP2-293 | 第50页 |
| ·重组假型病毒的收获 | 第50页 |
| ·病毒滴度的检测 | 第50页 |
| ·假型重组逆转录病毒感染PK15 细胞 | 第50页 |
| ·P1 基因体外表达的检测 | 第50-51页 |
| ·P1 基因的PCR 整合鉴定 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光检测P1 基因的表达 | 第51页 |
| ·P1 基因在PK15 细胞中的稳定性鉴定 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-53页 |
| ·SVDV HK/70 P1 基因的PCR 扩增结果 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pBABE puro-P1 的鉴定结果 | 第52页 |
| ·假型病毒感染PK15 细胞后PCR 鉴定P1 基因的整合结果 | 第52页 |
| ·免疫荧光检测PK15 细胞中P1 基因的表达 | 第52-53页 |
| ·P1 基因的稳定性整合鉴定结果 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 猪水疱病亚单位疫苗的豚鼠免疫实验 | 第55-62页 |
| ·材料与方法 | 第55-58页 |
| ·免疫原与实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·免疫用抗原的制备 | 第55页 |
| ·重组抗原对豚鼠的免疫程序 | 第55页 |
| ·T 淋巴细胞增殖实验 | 第55-57页 |
| ·各种溶液的配制 | 第56页 |
| ·淋巴细胞的分离方法 | 第56页 |
| ·淋巴细胞的增殖实验 | 第56-57页 |
| ·双夹心ELISA 检测免疫豚鼠的SVDV 特异性抗体 | 第57页 |
| ·SVDV HK/70 的复壮及半数细胞感染剂量(TCID50)的测定 | 第57页 |
| ·细胞中和实验测定豚鼠血清SVDV 抗体效价 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-60页 |
| ·T 淋巴细胞增殖实验 | 第58页 |
| ·免疫豚鼠SVDV 特异性抗体的动态变化 | 第58-59页 |
| ·SVDV 半数感染剂量的测定结果 | 第59-60页 |
| ·细胞中和实验测定豚鼠中和抗体 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 猪瘟亚单位疫苗的构建及体外表达 | 第62-73页 |
| ·材料与方法 | 第62-68页 |
| ·质粒载体、工程菌及主要试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·细胞 | 第63页 |
| ·引物的设计与合成 | 第63页 |
| ·目的基因的获取 | 第63-64页 |
| ·重组质粒的构建、克隆及鉴定 | 第64-66页 |
| ·构建策略 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的构建及克隆的基本方法 | 第65-66页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态的制备 | 第65页 |
| ·PCR 产物及载体质粒的酶切、回收及连接 | 第65页 |
| ·连接产物的转化 | 第65页 |
| ·重组质粒的制备 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第66页 |
| ·重组CSFV Shimen E2 基因的逆转录病毒载体的构建 | 第66页 |
| ·重组质粒的测序 | 第66页 |
| ·体外转染质粒的制备 | 第66-67页 |
| ·转染包装细胞GP2-293 | 第67页 |
| ·重组假型病毒的收获 | 第67页 |
| ·病毒滴度的检测 | 第67页 |
| ·假型重组逆转录病毒感染PK15 细胞 | 第67-68页 |
| ·E2 基因体外表达的检测 | 第68页 |
| ·E2 基因的PCR 整合鉴定 | 第68页 |
| ·间接免疫荧光检测E2 基因的表达 | 第68页 |
| ·夹心 ELISA 检测 E2 蛋白的活性 | 第68页 |
| ·E2 基因在PK15 细胞中的稳定性整合鉴定 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·CSFV Shimen E2 基因的PCR 扩增结果 | 第68页 |
| ·重组质粒pBABE puro-E2 的鉴定结果 | 第68-69页 |
| ·假型病毒感染PK15 细胞后PCR 鉴定E2 基因的整合结果 | 第69页 |
| ·E2 基因的稳定性整合鉴定结果 | 第69-70页 |
| ·免疫荧光检测PK15 细胞中E2 基因的表达 | 第70页 |
| ·ELISA 检测细胞培养物中E2 蛋白的生物学活性 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第七章 猪瘟亚单位疫苗的兔免疫保护实验 | 第73-80页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·免疫用的抗原的制备 | 第73页 |
| ·重组抗原对家兔的免疫实验 | 第73-74页 |
| ·T 淋巴细胞增殖实验 | 第74页 |
| ·各种溶液的配制 | 第74页 |
| ·淋巴细胞的分离方法 | 第74页 |
| ·T 淋巴细胞增殖实验 | 第74页 |
| ·阻断ELISA 检测免疫家兔的CSFV 特异性抗体 | 第74-75页 |
| ·实验兔子的病毒攻击保护实验 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-78页 |
| ·T 淋巴细胞增殖情况 | 第75页 |
| ·免疫兔子CSFV 特异性抗体的动态变化 | 第75-77页 |
| ·攻毒兔子的免疫保护实验结果 | 第77-78页 |
| ·兔子体温变化 | 第77页 |
| ·攻毒兔子脾脏变化 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-95页 |
| 附录 | 第95-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
