| 第一章 文献综述 | 第1-31页 |
| ·引言 | 第8-9页 |
| ·肠激酶简介 | 第9-12页 |
| ·肠激酶结构特点 | 第9页 |
| ·肠激酶的酶学特点 | 第9-10页 |
| ·肠激酶的生理特点 | 第10页 |
| ·肠激酶的基因工程的研究进展 | 第10-12页 |
| ·在原核生物中的表达 | 第10-11页 |
| ·在真核生物中的表达 | 第11页 |
| ·在动物细胞中的表达 | 第11-12页 |
| ·包涵体的复性 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的变性及体外折叠复性的理论基础 | 第12页 |
| ·包涵体的制备 | 第12-13页 |
| ·包涵体蛋白质的体外折叠复性 | 第13-20页 |
| ·折叠促进剂协助复性 | 第14-17页 |
| ·氧化—还原转换系统： | 第14页 |
| ·小分子质量添加剂： | 第14-15页 |
| ·聚乙二醇(PEG)： | 第15页 |
| ·两性离子去污剂或表面活性剂： | 第15页 |
| ·单克隆抗体： | 第15页 |
| ·分子伴侣和折叠酶等： | 第15-17页 |
| ·包涵体蛋白的体外折叠复性方法 | 第17-20页 |
| ·透析复性，稀释复性与超滤复性 | 第18页 |
| ·反向微团复性法 | 第18-19页 |
| ·双水相复性法 | 第19-20页 |
| ·层析折叠复性 | 第20-25页 |
| ·凝胶过滤层析复性法(SEC) | 第20-21页 |
| ·疏水层析复性法(HIC) | 第21-22页 |
| ·离子交换层析复性法(IEC) | 第22页 |
| ·亲和层析复性法(AFC) | 第22-23页 |
| ·层析技术的合理运用 | 第23-25页 |
| ·研究思路 | 第25-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-36页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·菌种与质粒 | 第31页 |
| ·仪器和试剂 | 第31-32页 |
| ·分离材料 | 第32-33页 |
| ·实验及分析方法 | 第33-36页 |
| ·大肠杆菌菌体浓度测定 | 第33页 |
| ·酶液的保存 | 第33页 |
| ·菌种保藏 | 第33页 |
| ·大肠杆菌细胞破碎及胞内蛋白提取 | 第33-34页 |
| ·蛋白测定 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| 第三章 肠激酶的初步表达 | 第36-43页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-37页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·仪器和试剂 | 第37页 |
| ·分离材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·重组大肠杆菌的培养与表达 | 第37页 |
| ·目的融合蛋白的分离 | 第37-38页 |
| ·亲和层析分离目的融合蛋白 | 第37页 |
| ·目的蛋白的G10柱脱盐 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-41页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·EKLC工程菌的培养扩增与诱导表达 | 第39页 |
| ·工程菌的培养扩增与诱导表达 | 第39-40页 |
| ·亲和分离法得到EKLC融合蛋白 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第四章 重组sBEKLC的表达优化及其分离纯化 | 第43-55页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·渗透冲击提取目的蛋白 | 第44页 |
| ·表达条件的优化 | 第44页 |
| ·亲和层析分离渗透冲击液中sBEKLC1SX | 第44-45页 |
| ·纯化sBEKLC1SX的脱盐 | 第45页 |
| ·表达产物活性的分析 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-53页 |
| ·渗透冲击法提取目的蛋白 | 第45-46页 |
| ·渗透冲击所得酶得活性鉴定 | 第46-48页 |
| ·表达条件的优化 | 第48-51页 |
| ·诱导温度的选择 | 第48-49页 |
| ·诱导剂终浓度的选择 | 第49-50页 |
| ·表达时间的确定 | 第50-51页 |
| ·肠激酶粗酶的提纯(BL21(DE3)／pET39-sBEKLC1SX) | 第51-52页 |
| ·精制酶液的活性检测 | 第52-53页 |
| ·目的蛋白的G10柱脱盐 | 第52-53页 |
| ·透析脱盐 | 第53页 |
| ·纯酶活性的考察(sBEKLC1SX) | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第五章 金属螯和层析纯化和复性基因工程产物肠激酶 | 第55-64页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·菌种 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·分离材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·重组大肠杆菌的培养与表达 | 第56页 |
| ·融合蛋白包涵体的分离与洗涤 | 第56页 |
| ·目的蛋白包涵体的变性溶解 | 第56-57页 |
| ·目的蛋白包涵体的复性 | 第57-58页 |
| ·目的蛋白变性产物的亲和复性 | 第57页 |
| ·目的蛋白的G10柱脱盐 | 第57页 |
| ·金属鳌合复性条件的优化 | 第57页 |
| ·复性产物生物活性的鉴定 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-63页 |
| ·EKLC的表达 | 第58页 |
| ·包涵体的初步纯化 | 第58-59页 |
| ·目的蛋白的复性与分离纯化 | 第59页 |
| ·蛋白复性条件的优化 | 第59-61页 |
| ·尿素浓度对复性的影响 | 第59-60页 |
| ·氧化还原环境(GSH／GSSG之比)对复性的影响 | 第60-61页 |
| ·复性时间对复性的影响 | 第61页 |
| ·EKLC生物活性检测 | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第六章 结论与建议 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·建议 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |