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ATHK1参与ABA诱导气孔关闭的信号转导过程

目录第1-8页
中文摘要第8-10页
ABSTRACT第10-12页
英文缩写表第12-14页
第一部分 文献综述第14-36页
 第一章 气孔关闭与保卫细胞信号转导第14-35页
   ·水分胁迫与气孔关闭第14-17页
     ·植物气孔第14-15页
     ·水分胁迫、脱落酸与气孔关闭第15-17页
   ·保卫细胞信号传导途径第17-26页
     ·保卫细胞 ABA 信号转导第17-20页
       ·ABA 受体第17-19页
       ·ABA 信号途径中的关键基因和中间组分第19-20页
       ·ABA 对下游离子通道的调节第20页
     ·保卫细胞中过氧化氢信号传导第20-24页
       ·过氧化氢的产生第21页
       ·过氧化氢信号的传递第21-24页
         ·蛋白激酶和蛋白磷酸化酶第21-22页
         ·一氧化氮第22-23页
         ·G 蛋白第23页
         ·细胞质中 Ca~(2+)第23-24页
     ·保卫细胞中的钙信号第24-26页
       ·钙信号的产生和终止第24-25页
       ·钙信号的传递第25-26页
   ·离子通道与气孔运动第26-31页
     ·质膜 K+通道与气孔运动第26-27页
       ·内向 K+通道(K~+_(in))第26-27页
       ·外向 K+通道(K~+_(out))第27页
     ·质膜 Ca~(2+)通道与气孔运动第27-29页
     ·质膜阴离子通道与气孔运动第29-30页
       ·慢型阴离子通道(S-type anion channels)第29-30页
       ·快型阴离子通道(R-type anion channels)第30页
     ·离子通道的常用研究方法第30-31页
       ·电压钳技术(Voltage clamp technique)第30-31页
       ·膜片钳技术(Patch clamp technique)第31页
   ·组氨酸激酶第31-35页
     ·双组分信号系统第31-32页
     ·拟南芥中的组氨酸激酶第32-34页
     ·组氨酸蛋白激酶 1 与气孔运动第34-35页
 第二章 研究意义第35-36页
第二部分 研究报告第36-77页
 第三章 ATHK1 表型初步分析和组织、亚细胞定位第36-55页
   ·引言第36页
   ·材料和方法第36-48页
     ·拟南芥的种植方法第36-37页
     ·药品试剂第37-40页
       ·培养基及缓冲液配置第37-39页
       ·常用抗生素溶液第39-40页
       ·其他常用试剂第40页
     ·质粒载体与菌株第40-41页
     ·实验方法第41-42页
       ·拟南芥基因组 DNA 的提取第41页
       ·PCR 扩增:(20μL 反应体系)第41页
       ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳:第41-42页
     ·质粒及载体构建第42-47页
       ·DNA 的限制性内切酶消化:第42页
       ·DNA 片段的连接:第42-43页
       ·RNA 的提取以及 cDNA 的合成第43页
       ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞第43-44页
       ·农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株 GV3101 感受态的制备及转化第44页
       ·开花浸染拟南芥的转化第44-45页
       ·GUS 载体构建第45-47页
       ·GFP 载体构建第47页
     ·GUS 染色第47页
       ·GUS 染色剂的配置(使用前配制)第47页
       ·染色操作:第47页
     ·GFP 荧光分析第47-48页
     ·PCR 引物第48页
   ·结果与分析第48-53页
     ·T-DNA 纯合体鉴定第48-49页
     ·野生型与突变体在萌发方面的表型比较第49-50页
     ·野生型与突变体在根伸长方面的表型比较第50-51页
     ·野生型与突变体在气孔运动方面的表型比较第51页
     ·ATHK1 的组织定位第51-52页
     ·ATHK1 的亚细胞定位第52-53页
   ·讨论第53-55页
 第四章 ATHK1 参与气孔关闭并介导 ABA 诱导的 H2O2产生第55-61页
   ·引言第55页
   ·材料和方法第55-56页
     ·植物材料第55-56页
     ·药品试剂第56页
     ·实验方法第56页
       ·表皮条生物分析和失水测定第56页
       ·激光共聚焦实验第56页
   ·结果与分析第56-59页
     ·野生型与突变体在气孔关闭和失水等方面存在差异第57-58页
     ·ATHK1 参与到拟南芥中 ABA 和 H2O2诱导的气孔关闭过程第58页
     ·ATHK1 缺失不能阻止保卫细胞中 ABA 诱导的 H2O2产生第58-59页
   ·讨论第59-61页
 第五章 ATHK1 调节保卫细胞钙离子通道和胞质钙震荡第61-68页
   ·引言第61页
   ·材料方法第61-62页
     ·植物材料第61页
     ·药品试剂第61-62页
     ·实验方法第62页
       ·激光共聚焦实验第62页
       ·膜片钳测量钙通道电流第62页
   ·结果与分析第62-66页
     ·ATHK1 调节 ABA 和 H2O2诱导的保卫细胞钙通道电流变化第62-64页
     ·ATHK1 影响了 ABA 和 H2O2诱导的保卫细胞内钙浓度变化第64-65页
     ·ATHK1 调控保卫细胞内钙的浓度波动节律第65-66页
   ·讨论第66-68页
 第六章 ATHK1 对质膜钾通道的调控第68-75页
   ·引言第68页
   ·材料和方法第68-70页
     ·植物材料第68-69页
     ·药品试剂第69页
     ·研究方法第69-70页
       ·保卫细胞原生质体的制备第69-70页
       ·保卫细胞原生质体全细胞质膜内向 K~+通道电流的测定第70页
   ·结果与分析第70-73页
     ·ATHK1 在 WS 野生型和突变体保卫细胞中差异表达第70-71页
     ·ATHK1 与 H2O2互作来调节保卫细胞质膜钾通道第71-73页
   ·讨论第73-75页
 第七章 结论第75-77页
参考文献第77-93页
致谢第93页

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