目录 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
英文缩写表 | 第12-14页 |
第一部分 文献综述 | 第14-36页 |
第一章 气孔关闭与保卫细胞信号转导 | 第14-35页 |
·水分胁迫与气孔关闭 | 第14-17页 |
·植物气孔 | 第14-15页 |
·水分胁迫、脱落酸与气孔关闭 | 第15-17页 |
·保卫细胞信号传导途径 | 第17-26页 |
·保卫细胞 ABA 信号转导 | 第17-20页 |
·ABA 受体 | 第17-19页 |
·ABA 信号途径中的关键基因和中间组分 | 第19-20页 |
·ABA 对下游离子通道的调节 | 第20页 |
·保卫细胞中过氧化氢信号传导 | 第20-24页 |
·过氧化氢的产生 | 第21页 |
·过氧化氢信号的传递 | 第21-24页 |
·蛋白激酶和蛋白磷酸化酶 | 第21-22页 |
·一氧化氮 | 第22-23页 |
·G 蛋白 | 第23页 |
·细胞质中 Ca~(2+) | 第23-24页 |
·保卫细胞中的钙信号 | 第24-26页 |
·钙信号的产生和终止 | 第24-25页 |
·钙信号的传递 | 第25-26页 |
·离子通道与气孔运动 | 第26-31页 |
·质膜 K+通道与气孔运动 | 第26-27页 |
·内向 K+通道(K~+_(in)) | 第26-27页 |
·外向 K+通道(K~+_(out)) | 第27页 |
·质膜 Ca~(2+)通道与气孔运动 | 第27-29页 |
·质膜阴离子通道与气孔运动 | 第29-30页 |
·慢型阴离子通道(S-type anion channels) | 第29-30页 |
·快型阴离子通道(R-type anion channels) | 第30页 |
·离子通道的常用研究方法 | 第30-31页 |
·电压钳技术(Voltage clamp technique) | 第30-31页 |
·膜片钳技术(Patch clamp technique) | 第31页 |
·组氨酸激酶 | 第31-35页 |
·双组分信号系统 | 第31-32页 |
·拟南芥中的组氨酸激酶 | 第32-34页 |
·组氨酸蛋白激酶 1 与气孔运动 | 第34-35页 |
第二章 研究意义 | 第35-36页 |
第二部分 研究报告 | 第36-77页 |
第三章 ATHK1 表型初步分析和组织、亚细胞定位 | 第36-55页 |
·引言 | 第36页 |
·材料和方法 | 第36-48页 |
·拟南芥的种植方法 | 第36-37页 |
·药品试剂 | 第37-40页 |
·培养基及缓冲液配置 | 第37-39页 |
·常用抗生素溶液 | 第39-40页 |
·其他常用试剂 | 第40页 |
·质粒载体与菌株 | 第40-41页 |
·实验方法 | 第41-42页 |
·拟南芥基因组 DNA 的提取 | 第41页 |
·PCR 扩增:(20μL 反应体系) | 第41页 |
·DNA 的琼脂糖凝胶电泳: | 第41-42页 |
·质粒及载体构建 | 第42-47页 |
·DNA 的限制性内切酶消化: | 第42页 |
·DNA 片段的连接: | 第42-43页 |
·RNA 的提取以及 cDNA 的合成 | 第43页 |
·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第43-44页 |
·农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株 GV3101 感受态的制备及转化 | 第44页 |
·开花浸染拟南芥的转化 | 第44-45页 |
·GUS 载体构建 | 第45-47页 |
·GFP 载体构建 | 第47页 |
·GUS 染色 | 第47页 |
·GUS 染色剂的配置(使用前配制) | 第47页 |
·染色操作: | 第47页 |
·GFP 荧光分析 | 第47-48页 |
·PCR 引物 | 第48页 |
·结果与分析 | 第48-53页 |
·T-DNA 纯合体鉴定 | 第48-49页 |
·野生型与突变体在萌发方面的表型比较 | 第49-50页 |
·野生型与突变体在根伸长方面的表型比较 | 第50-51页 |
·野生型与突变体在气孔运动方面的表型比较 | 第51页 |
·ATHK1 的组织定位 | 第51-52页 |
·ATHK1 的亚细胞定位 | 第52-53页 |
·讨论 | 第53-55页 |
第四章 ATHK1 参与气孔关闭并介导 ABA 诱导的 H2O2产生 | 第55-61页 |
·引言 | 第55页 |
·材料和方法 | 第55-56页 |
·植物材料 | 第55-56页 |
·药品试剂 | 第56页 |
·实验方法 | 第56页 |
·表皮条生物分析和失水测定 | 第56页 |
·激光共聚焦实验 | 第56页 |
·结果与分析 | 第56-59页 |
·野生型与突变体在气孔关闭和失水等方面存在差异 | 第57-58页 |
·ATHK1 参与到拟南芥中 ABA 和 H2O2诱导的气孔关闭过程 | 第58页 |
·ATHK1 缺失不能阻止保卫细胞中 ABA 诱导的 H2O2产生 | 第58-59页 |
·讨论 | 第59-61页 |
第五章 ATHK1 调节保卫细胞钙离子通道和胞质钙震荡 | 第61-68页 |
·引言 | 第61页 |
·材料方法 | 第61-62页 |
·植物材料 | 第61页 |
·药品试剂 | 第61-62页 |
·实验方法 | 第62页 |
·激光共聚焦实验 | 第62页 |
·膜片钳测量钙通道电流 | 第62页 |
·结果与分析 | 第62-66页 |
·ATHK1 调节 ABA 和 H2O2诱导的保卫细胞钙通道电流变化 | 第62-64页 |
·ATHK1 影响了 ABA 和 H2O2诱导的保卫细胞内钙浓度变化 | 第64-65页 |
·ATHK1 调控保卫细胞内钙的浓度波动节律 | 第65-66页 |
·讨论 | 第66-68页 |
第六章 ATHK1 对质膜钾通道的调控 | 第68-75页 |
·引言 | 第68页 |
·材料和方法 | 第68-70页 |
·植物材料 | 第68-69页 |
·药品试剂 | 第69页 |
·研究方法 | 第69-70页 |
·保卫细胞原生质体的制备 | 第69-70页 |
·保卫细胞原生质体全细胞质膜内向 K~+通道电流的测定 | 第70页 |
·结果与分析 | 第70-73页 |
·ATHK1 在 WS 野生型和突变体保卫细胞中差异表达 | 第70-71页 |
·ATHK1 与 H2O2互作来调节保卫细胞质膜钾通道 | 第71-73页 |
·讨论 | 第73-75页 |
第七章 结论 | 第75-77页 |
参考文献 | 第77-93页 |
致谢 | 第93页 |