| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 一、文献综述 | 第11-29页 |
| ·人粒巨噬细胞集落刺激因子研究进展 | 第11-17页 |
| ·hGM-CSF的结构特点及生物学活性 | 第11-13页 |
| ·hGM-CSF的结构特点 | 第11-12页 |
| ·hGM-CSF的生物学活性 | 第12-13页 |
| ·hGM-CSF的表达调控 | 第13-17页 |
| ·hGM-CSF 的表达体系 | 第13-15页 |
| ·hGM-CSF 表达水平调控 | 第15-17页 |
| ·蓝藻基因工程 | 第17-26页 |
| ·蓝藻基因组的研究 | 第18页 |
| ·蓝藻基因工程载体 | 第18-20页 |
| ·穿梭表达载体 | 第19-20页 |
| ·整合载体和转座子 | 第20页 |
| ·噬菌体载体 | 第20页 |
| ·蓝藻基因转移系统的选择 | 第20-22页 |
| ·遗传转化 | 第20-21页 |
| ·接合转移 | 第21-22页 |
| ·蓝藻表达外源基因的进展 | 第22-26页 |
| ·蓝藻作为表达外源基因宿主的优势 | 第22-23页 |
| ·已在蓝藻中成功表达的外源基因 | 第23页 |
| ·蓝藻中外源基因的表达调控 | 第23-26页 |
| ·蓝藻中表达外源基因的不足 | 第26页 |
| ·本实验的研究内容、目的与意义 | 第26-29页 |
| ·本研究的内容 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-29页 |
| 二、材料与方法 | 第29-40页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻株 | 第29页 |
| ·工具酶和试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·培养基的配制 | 第30-31页 |
| ·蓝藻的培养、纯化及保存 | 第31-32页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第32-36页 |
| ·hGM-CSF 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·hGM-CSF基因的修饰 | 第33-34页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·蓝藻的转化与筛选 | 第36-37页 |
| ·蓝藻的转化 | 第36-37页 |
| ·转基因蓝藻的筛选 | 第37页 |
| ·转基因藻的DNA 检测 | 第37-38页 |
| ·蓝藻的破碎 | 第37页 |
| ·蓝藻总 DNA 的提取 | 第37页 |
| ·转基因藻的PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·转基因藻的Western Blot 分析 | 第38页 |
| ·转基因藻蛋白样品的制备 | 第38页 |
| ·蛋白样品的定量 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第38页 |
| ·转移 | 第38页 |
| ·免疫反应 | 第38页 |
| ·转基因藻生理活性的检测 | 第38-39页 |
| ·生长曲线的测定 | 第38-39页 |
| ·光合放氧活性的的测定 | 第39页 |
| ·转基因藻培养条件的优化 | 第39-40页 |
| ·不同温度下转基因藻培养条件的优化 | 第39页 |
| ·不同pH 下转基因藻培养条件的优化 | 第39-40页 |
| 三、结果与分析 | 第40-64页 |
| ·hGM-CSF 基因在鱼腥藻7120 中的表达 | 第40-52页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GM0 的构建 | 第40-44页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GM0 的构建图 | 第40-41页 |
| ·hGM-CSF的核苷酸及氨基酸序列 | 第41页 |
| ·hGM-CSF基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·中间载体的构建 | 第42-43页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·GM_0 藻株的获得 | 第44-45页 |
| ·GM_0 藻株的平板筛选 | 第44页 |
| ·GM_0 藻株的液体筛选与扩大培养 | 第44-45页 |
| ·GM_0 藻株的检测 | 第45-47页 |
| ·GM_0藻株的PCR 检测 | 第45-46页 |
| ·GM_0藻株表达产物的Western Blot 检测 | 第46-47页 |
| ·GM_0 藻株的培养及生理活性的检测 | 第47-49页 |
| ·GM_0 藻株生长曲线的测定 | 第47-48页 |
| ·GM_0 藻株光合放氧活性的测定 | 第48-49页 |
| ·环境因子对 GM_0 藻株生长的影响 | 第49-52页 |
| ·温度对GM0 藻株生长的影响 | 第49-50页 |
| ·pH 对GM0藻株生长的影响 | 第50-52页 |
| ·hGM-CSF的基因修饰及其在鱼腥藻7120中的表达 | 第52-64页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GM1 的构建 | 第52-56页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GM1 的构建图 | 第52-53页 |
| ·hGM-CSF基因的克隆与修饰 | 第53-54页 |
| ·中间载体的构建 | 第54-55页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·GM_1 藻株的获得 | 第56-57页 |
| ·GM1 藻株的平板筛选 | 第56页 |
| ·GM_1 藻株的液体培养与筛选 | 第56-57页 |
| ·GM_1 藻株的分子检测 | 第57-59页 |
| ·GM_1藻株中目的基因的PCR 检测 | 第57-58页 |
| ·GM_1藻株中表达产物的Western Blot 检测及比较 | 第58-59页 |
| ·GM_1 藻株的培养、生理活性的检测与比较 | 第59-62页 |
| ·GM_1 藻株生长曲线的测定与比较 | 第59-60页 |
| ·GM_1 藻株光合放氧活性的测定与比较 | 第60-62页 |
| ·环境因子对 GM_1 藻株生长的影响 | 第62-64页 |
| ·温度对 GM_1 藻株生长的影响 | 第62-63页 |
| ·pH 对GM1 藻株生长的影响 | 第63-64页 |
| 四、讨论 | 第64-70页 |
| ·利用蓝藻作为宿主表达hGM-CSF 的可行性 | 第64-66页 |
| ·利用基因工程手段制备hGM-CSF 的必要性 | 第64页 |
| ·在鱼腥藻7120 中表达hGM-CSF 的优势 | 第64-65页 |
| ·在鱼腥藻7120 中成功表达hGM-CSF | 第65-66页 |
| ·基因修饰是提高外源基因在蓝藻细胞中表达的有效途径 | 第66-67页 |
| ·SD 序列对外源基因表达效率的影响 | 第66-67页 |
| ·遗传密码子的偏好性对外源基因表达效率的影响 | 第67页 |
| ·基因修饰对转基因藻生长及光合活性的影响 | 第67-68页 |
| ·通过优化培养条件提高转基因藻的生长 | 第68-70页 |
| ·不同温度条件对转基因藻生长的影响 | 第68-69页 |
| ·不同pH 对转基因藻生长的影响 | 第69-70页 |
| 五、结论与展望 | 第70-73页 |
| ·结论 | 第70-72页 |
| ·展望 | 第72-73页 |
| 六、参考文献 | 第73-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| hGM-CSF 基因PCR 产物测序结果 | 第81-82页 |
| 基因修饰后的hGM-CSF 基因PCR 产物测序结果 | 第82-83页 |
| 缩写表 | 第83-85页 |
| 在校期间撰写与发表的论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 论文独创性声明 | 第87页 |
| 论文使用授权声明 | 第87-88页 |
