| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| ·使用大肠杆菌工程菌表达基因重组蛋白质 | 第14-15页 |
| ·包涵体蛋白的重折叠复性 | 第15-22页 |
| ·包涵体的物理化学性质 | 第15-16页 |
| ·包涵体蛋白的形成原因 | 第16-17页 |
| ·包涵体蛋白的分离纯化与溶解变性 | 第17-18页 |
| ·包涵体蛋白的分离与纯化 | 第17页 |
| ·包涵体蛋白的溶解变性 | 第17-18页 |
| ·包涵体蛋白的重折叠复性 | 第18-22页 |
| ·包涵体蛋白重折叠复性的原理 | 第18-19页 |
| ·包涵体蛋白重折叠复性的方法 | 第19-22页 |
| ·脱氧核糖核酸酶Ⅰ | 第22-27页 |
| ·脱氧核糖核酸酶的分类 | 第22页 |
| ·DNaseⅠ的理化性质和生物学作用 | 第22-24页 |
| ·DNaseⅠ的理化性质 | 第23页 |
| ·DNaseⅠ的生物学作用 | 第23-24页 |
| ·DNaseⅠ的分子生物学 | 第24页 |
| ·DNaseⅠ的基因 | 第24页 |
| ·DNaseⅠ的表达分布 | 第24页 |
| ·DNaseⅠ的分子结构和空间构象 | 第24-25页 |
| ·DNaseⅠ的分子结构 | 第24-25页 |
| ·DNaseⅠ的空间构象 | 第25页 |
| ·DNaseⅠ的生产方法 | 第25-26页 |
| ·天然提取法 | 第25-26页 |
| ·基因工程法 | 第26页 |
| ·复性后 DNaseⅠ的检测方法 | 第26-27页 |
| ·研究思路 | 第27-30页 |
| 第二章 重组人 DNaseⅠ基因工程菌发酵条件的优化 | 第30-39页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料和实验仪器 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-32页 |
| ·菌种活化 | 第31页 |
| ·种子液培养 | 第31页 |
| ·发酵过程中各因素对基因工程菌目标蛋白表达的影响 | 第31-32页 |
| ·基因工程菌生长曲线的研究 | 第31页 |
| ·培养基组成对基因工程菌目标蛋白表达的影响 | 第31-32页 |
| ·发酵条件对基因工程菌目标蛋白表达的影响 | 第32页 |
| ·分析方法 | 第32-33页 |
| ·菌体浓度测定 | 第32-33页 |
| ·重组人 DNaseⅠ表达水平测定 | 第33页 |
| ·试验结果与讨论 | 第33-37页 |
| ·人 DNaseⅠ基因工程菌的生长 | 第33-34页 |
| ·重组人 DNaseⅠ的表达情况 | 第34页 |
| ·YE 和 Try 重组人 DNaseⅠ表达水平的影响 | 第34-36页 |
| ·发酵条件对重组人 DNaseⅠ表达水平的影响 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 重组人 DNaseⅠ包涵体的预处理及复性研究 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料和仪器 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·实验仪器 | 第40页 |
| ·试验方法 | 第40-42页 |
| ·包涵体的制备 | 第40-41页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第41页 |
| ·包涵体蛋白的溶解变性 | 第41页 |
| ·包涵体溶解蛋白的稀释复性 | 第41-42页 |
| ·分析方法 | 第42-44页 |
| ·包涵体纯度测定 | 第42页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第42页 |
| ·DNaseⅠ活性测定 | 第42-44页 |
| ·琼脂糖电泳法检验酶活 | 第42-43页 |
| ·单向酶扩散法测定酶活 | 第43页 |
| ·紫外吸收法定量测酶活 | 第43-44页 |
| ·试验结果与讨论 | 第44-52页 |
| ·细胞破碎与包涵体制备 | 第44页 |
| ·DNaseⅠ包涵体的洗涤和溶解变性 | 第44-46页 |
| ·重组人 DNaseⅠ包涵体稀释复性的研究 | 第46-52页 |
| ·重组人 DNaseⅠ包涵体变性液稀释倍数对重折叠的影响 | 第46-48页 |
| ·尿素浓度对重组人 DNaseⅠ复性的影响 | 第48-49页 |
| ·温度对重组人 DNaseⅠ复性的影响 | 第49页 |
| ·加样方式对重组人 DNaseⅠ复性的影响 | 第49-50页 |
| ·重组人 DNaseⅠ的活性检测 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 重组人 DNaseⅠ包涵体的透析复性的研究 | 第53-61页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料和仪器 | 第53-54页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·重组人 DNaseⅠ包涵体蛋白溶解液的制备 | 第54页 |
| ·直接透析法复性包涵体溶解蛋白 | 第54-55页 |
| ·分步透析法复性包涵体溶解蛋白 | 第55页 |
| ·连续透析法复性包涵体溶解蛋白 | 第55-56页 |
| ·分析方法 | 第56-57页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第56页 |
| ·SDS PAGE | 第56页 |
| ·DNaseⅠ活性测定 | 第56-57页 |
| ·琼脂糖电泳法检验酶活 | 第56-57页 |
| ·单向酶扩散法测定酶活 | 第57页 |
| ·紫外吸收法定量测酶活 | 第57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-60页 |
| ·透析法复性重组人 DNaseⅠ | 第57-59页 |
| ·直接透析法复性重组人 DNaseⅠ | 第57-58页 |
| ·分步透析法复性重组人 DNaseⅠ | 第58页 |
| ·连续透析法复性重组人 DNaseⅠ | 第58-59页 |
| ·三种透析法复性的比较 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 重组人 DNaseⅠ包涵体的凝胶过滤色谱复性的研究 | 第61-73页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·试验材料和仪器 | 第62页 |
| ·试验材料 | 第62页 |
| ·试验仪器 | 第62页 |
| ·试验方法 | 第62-64页 |
| ·重组人 DNaseⅠ包涵体溶解蛋白的制备 | 第62页 |
| ·凝胶过滤色谱复性重组人 DNaseⅠ包涵体 | 第62-64页 |
| ·非尿素梯度的凝胶过滤色谱复性 | 第62-63页 |
| ·尿素梯度的凝胶过滤色谱复性 | 第63-64页 |
| ·改良的非尿素梯度的凝胶过滤色谱复性 | 第64页 |
| ·分析方法 | 第64-65页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第64页 |
| ·SDS PAGE | 第64-65页 |
| ·DNaseⅠ活性测定 | 第65页 |
| ·琼脂糖电泳法检验酶活 | 第65页 |
| ·单向酶扩散法测定酶活 | 第65页 |
| ·紫外吸收法定量测酶活 | 第65页 |
| ·实验结果与讨论 | 第65-71页 |
| ·凝胶过滤色谱复性重组人 DNaseⅠ | 第65-69页 |
| ·非尿素梯度的凝胶过滤色谱复性重组人 DNaseⅠ | 第65-67页 |
| ·尿素梯度的凝胶过滤色谱复性重组人 DNaseⅠ | 第67-68页 |
| ·改良的非尿素梯度的凝胶过滤色谱复性重组人 DNaseⅠ | 第68-69页 |
| ·三种凝胶色谱过滤复性的比较 | 第69-71页 |
| ·三种复性方法的酶活性 | 第69-70页 |
| ·三种复性方法色谱图像的比较 | 第70页 |
| ·色谱条件的变化对三种复性方法的影响 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第六章 结论与建议 | 第73-75页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·建议 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 附录一 实验材料与试剂 | 第79-80页 |
| 附录二 实验仪器 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 作者及导师简介 | 第83-84页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第84-85页 |
