| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-22页 |
| 1 白藜芦醇的研究进展 | 第8-14页 |
| ·白藜芦醇的发现 | 第8页 |
| ·白藜芦醇的理化性质 | 第8页 |
| ·白藜芦醇的药理作用及作用机理 | 第8-9页 |
| ·白藜芦醇在葡萄植物体内的代谢及影响代谢的因素 | 第9-13页 |
| ·生物合成 | 第9页 |
| ·有关合成白藜芦醇的酶 | 第9-13页 |
| ·有关白藜芦醇的诱导 | 第13-14页 |
| 2 白藜芦醇合成酶基因研究进展 | 第14-16页 |
| ·白藜芦醇合成酶基因的结构 | 第14页 |
| ·白藜芦醇合成酶基因的转基因技术的研究进展 | 第14-15页 |
| ·白藜芦醇合成酶基因在基因转导过程中的异常表达 | 第15-16页 |
| 3 Pichia.pasteoris基因表达系统的研究进展 | 第16-21页 |
| ·表达载体的构成 | 第17-18页 |
| ·表达载体与宿主染色体的整合 | 第18-19页 |
| ·影响外源基因表达量的因素 | 第19-21页 |
| 4 实验的意义和研究内容 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第22-37页 |
| 1 主要试剂与仪器 | 第22-24页 |
| ·基本试剂及生产厂家 | 第22页 |
| ·酶和其他试剂 | 第22页 |
| ·本试验所用的菌株及质粒: | 第22页 |
| ·主要仪器和厂家 | 第22-23页 |
| ·试剂和培养基 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| 2 试验材料 | 第24页 |
| 3 实验方法 | 第24-37页 |
| ·用CTAB法提取葡萄叶片总DNA | 第24-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·目的DNA片段的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第26页 |
| ·菌体的培养与保存 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27-29页 |
| ·质粒的小量抽提采用碧云天质粒小量抽提试剂盒 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第28-29页 |
| ·DNA限制性内切酶酶切反应 | 第29页 |
| ·质粒pPU19和目的DNA片段的连接 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·溶液配制 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶配制 | 第30页 |
| ·电泳、检测及摄影 | 第30页 |
| ·目的片断的电泳回收 | 第30-31页 |
| ·冻融法 | 第30页 |
| ·DNA凝胶回收试剂盒(杭州维特洁生化技术有限公司) | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌(E coli) JM109感受态的制备 | 第31页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| ·含重组质粒菌落的筛选 | 第32-33页 |
| ·酵母的转导 | 第33-34页 |
| ·酵母质粒DNA的准备 | 第33页 |
| ·菌体的准备 | 第33页 |
| ·电激转化 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母表达直接PCR鉴定重组子 | 第34-35页 |
| ·模板的处理 | 第34页 |
| ·PCR反应体系 | 第34页 |
| ·PCR反应条件 | 第34-35页 |
| ·重组酵母的诱导表达试验 | 第35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)定性分析蛋白质 | 第35-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-48页 |
| 1 RS基因克隆载体的构建 | 第37-43页 |
| ·基因扩增 | 第37页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·测序结果 | 第38-39页 |
| ·RS基因的生物信息学分析 | 第39-43页 |
| ·序列的同源比对 | 第39-41页 |
| ·RS基因序列及推测的氨基酸序列 | 第41-42页 |
| ·对推测的氨基酸序列和GenBank中的RS序列进行同源性比较 | 第42-43页 |
| 2 RS基因酵母表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·RS基因的获得 | 第43页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·裂解检测质粒DNA分子大小 | 第44页 |
| ·对构建好的载体进行酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3 酵母的转化及筛选 | 第45-46页 |
| ·重组型质粒转化酵母细胞 | 第45-46页 |
| ·重组酵母株的PCR鉴定 | 第46页 |
| 4 RS基因在毕赤酵母的表达 | 第46-48页 |
| 第四部分 讨论 | 第48-50页 |
| 第五部分 结论 | 第50-51页 |
| 第六部分 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
