| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述:黄瓜花叶病毒卫星RNA变异与进化的研究进展 | 第18-30页 |
| ·RNA病毒变异与进化的研究概况 | 第18-21页 |
| ·RNA病毒的类型 | 第18-19页 |
| ·RNA病毒的复制与转录 | 第19页 |
| ·RNA病毒的进化 | 第19-20页 |
| ·植物病毒是研究RNA病毒进化的良好模型 | 第20-21页 |
| ·植物病毒进化研究的概况 | 第21-22页 |
| ·植物病毒的起源 | 第21页 |
| ·植物病毒进化的原因 | 第21-22页 |
| ·黄瓜花叶病毒的研究进展 | 第22-25页 |
| ·黄瓜花叶病毒的基因组及其功能 | 第22-23页 |
| ·黄瓜花叶病毒引起的病害 | 第23-24页 |
| ·黄瓜花叶病毒的变异与进化 | 第24-25页 |
| ·黄瓜花叶病毒卫星RNA的研究进展 | 第25-28页 |
| ·卫星RNA及其与辅助病毒的关系 | 第25-26页 |
| ·卫星RNA的起源 | 第26页 |
| ·CMV卫星RNA的结构 | 第26-27页 |
| ·卫星RNA的变异和进化 | 第27-28页 |
| ·DNA改组技术和体外分子进化 | 第28-29页 |
| ·研究目的和内容 | 第29-30页 |
| 第二章 黄瓜花叶病毒卫星RNA的克隆及序列分析 | 第30-41页 |
| ·材料与方法 | 第30-36页 |
| ·病毒分离物 | 第30页 |
| ·酶与试剂 | 第30-31页 |
| ·病毒dsRNA的提取和分析 | 第31页 |
| ·RNA模板制备 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·试剂盒回收目的片段 | 第32-33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的筛选和制备 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·序列测定及分析 | 第34-36页 |
| ·结果和分析 | 第36-39页 |
| ·CMV分离物的dsRNA分析结果 | 第36页 |
| ·卫星RNA的RT-PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第37页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定结果 | 第37-38页 |
| ·卫星RNA序列分析结果 | 第38-39页 |
| ·小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 黄瓜花叶病毒与卫星RNA体外重组方法的建立及其选择关系的研究 | 第41-49页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·病毒分离物 | 第41-42页 |
| ·酶与试剂 | 第42页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第42页 |
| ·病毒侵染植株中总RNA的提取 | 第42页 |
| ·病毒dsRNA分析和RT-PCR检测卫星RNA | 第42页 |
| ·卫星RNA的体外转录 | 第42-43页 |
| ·卫星RNA与CMV的体外重组 | 第43页 |
| ·假重组毒株稳定性检验 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·2株CMV分别与satY369体外重组的结果 | 第43-44页 |
| ·4个卫星RNA分别与CMV-CNa体外重组的结果 | 第44-45页 |
| ·两个卫星RNA同时与CNa进行体外重组的结果 | 第45-46页 |
| ·假重组毒株在不同寄主植物中dsRNA的检测结果 | 第46页 |
| ·小结与讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 卫星RNA对黄瓜花叶病毒的影响 | 第49-59页 |
| ·材料与方法 | 第49-51页 |
| ·病毒分离物与质粒 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·病毒接种 | 第50页 |
| ·RNA模板的变性和点样 | 第50页 |
| ·Cy5标记DNA探针的制备 | 第50-51页 |
| ·玻片杂交 | 第51页 |
| ·扫描与数据处理 | 第51页 |
| ·不同接种时间RNA3和卫星RNA相对含量的分析 | 第51页 |
| ·不同寄主中CMV基因组RNA3和卫星RNA相对含量的分析 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·NY和CNa之dsRNA及RT-PCR分析结果 | 第51-52页 |
| ·NY和CNa的寄主症状反应 | 第52-54页 |
| ·不同接种时间RNA3和卫星RNA相对含量的比较 | 第54-55页 |
| ·不同寄主中RNA3和卫星RNA相对含量的比较 | 第55-57页 |
| ·卫星RNA对CMV-CNa基因组RNA3相对含量的影响 | 第57页 |
| ·小结与讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 黄瓜花叶病毒卫星RNA人工突变体 | 第59-70页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·质粒和病毒分离物 | 第60页 |
| ·酶与试剂 | 第60页 |
| ·理论卫星的设计 | 第60-61页 |
| ·PCR拼接DNA片段 | 第61页 |
| ·理论卫星质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第62-63页 |
| ·理论卫星RNA与CMV基因组的假重组 | 第63页 |
| ·理论卫星RNA的稳定性分析 | 第63页 |
| ·序列测定和分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-69页 |
| ·理论最大、最小卫星的设计结果 | 第63-64页 |
| ·理论最大、最小卫星DNA的拼接 | 第64-65页 |
| ·理论全长最大最小卫星DNA质粒的构建 | 第65页 |
| ·序列分析 | 第65-67页 |
| ·理论卫星RNA与CNa的假重组 | 第67页 |
| ·理论卫星RNA与CNa的假重组毒株在不同寄主中的dsRNA分析 | 第67页 |
| ·理论卫星RNA和CNY(satY369+CNa)的假重组 | 第67-69页 |
| ·小结与讨论 | 第69-70页 |
| 第六章 利用DNA改组技术构建卫星RNA突变体 | 第70-77页 |
| ·材料与方法 | 第70-73页 |
| ·质粒和病毒分离物 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70-71页 |
| ·DNA改组程序 | 第71-72页 |
| ·卫星DNA突变子的筛选 | 第72页 |
| ·突变子的侵染性分析 | 第72-73页 |
| ·序列分析 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-75页 |
| ·从质粒psatY用普通Taq酶进行PCR反应 | 第73页 |
| ·DNase Ⅰ降解 | 第73-74页 |
| ·突变子的筛选 | 第74-75页 |
| ·卫星突变子的侵染性实验 | 第75页 |
| ·序列分析 | 第75页 |
| ·小结与讨论 | 第75-77页 |
| 总讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 附件: 重要溶液的配制 | 第85-86页 |
