| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-35页 |
| 第一节 植物钙信号的研究进展 | 第16-24页 |
| 1 植物细胞信号转导 | 第16页 |
| 2 植物钙信号系统 | 第16-18页 |
| 3 植物钙调素 | 第18-21页 |
| ·钙调素基本结构 | 第18-19页 |
| ·植物钙调素亚型及功能 | 第19-21页 |
| 4 蛋白激酶与植物信号转导 | 第21-24页 |
| ·蛋白质的磷酸化与信号转导 | 第22页 |
| ·蛋白激酶的分类 | 第22-23页 |
| ·植物体内的蛋白激酶和信号转导 | 第23-24页 |
| 第二节 植物钙调素结合蛋白激酶的研究进展 | 第24-35页 |
| 1 钙依赖蛋白激酶和其相关的蛋白激酶 | 第24-26页 |
| 2 钙调素结合蛋白激酶 | 第26-31页 |
| ·动物体内的钙调素依赖型蛋白激酶 | 第26-29页 |
| ·植物体内的钙调素结合蛋白激酶 | 第29-30页 |
| ·植物钙调素结合蛋白激酶在植物发育和信号转导中的作用 | 第30-31页 |
| 3 钙信号传递链在植物体内的作用 | 第31-33页 |
| ·环境信号与钙信号传递链的关系 | 第31-32页 |
| ·植物发育与钙信号传递链的关系 | 第32页 |
| ·植物信号转导的研究展望 | 第32-33页 |
| 4 本项研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 烟草钙调素结合的蛋白激酶(NtCBK)结构和生化分析 | 第35-88页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| 第一节 烟草钙调素结合蛋白激酶基因序列的分析 | 第36-49页 |
| 一 材料和方法 | 第36-38页 |
| 1 基因序列的测定 | 第36页 |
| 2 Northern杂交 | 第36-38页 |
| 3 NtCBKs同其它的钙信号系统的蛋白激酶的比较 | 第38页 |
| 4 NtCBKs的钙调素结合区的分析 | 第38页 |
| 二 结果和讨论 | 第38-49页 |
| 1 NtCBK1／2基因序列 | 第38-44页 |
| 2 Northern blot结果 | 第44页 |
| 3 NtCBKs同其它的钙信号系统的蛋白激酶的比较 | 第44-48页 |
| 4 NtCBKs的钙调素结合区的预测 | 第48-49页 |
| 第二节 NtCBKs钙调素结合性质的分析 | 第49-63页 |
| 一 材料和方法 | 第50-57页 |
| 1 全基因和缺失突变体表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 2 蛋白表达载体的构建 | 第52页 |
| 3 重组载体转入表达宿主BL21 | 第52-53页 |
| 4 重组基因在大肠杆菌BL21中的表达 | 第53页 |
| 5 诱导蛋白的纯化 | 第53页 |
| 6 从工程菌中纯化水稻钙调素 | 第53-54页 |
| 7 生物素标记的钙调素结合实验 | 第54-56页 |
| 8 ~(35)S标记NtCaMs | 第56页 |
| 9 利用~(35)S标记CaM测定Kd常数 | 第56-57页 |
| 二 结果和讨论 | 第57-63页 |
| 1 重组NtCBK1全蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第57页 |
| 2 NtCBK1钙调素结合区的分析 | 第57-58页 |
| 3 ~(35)S标记NtCaMs的检测 | 第58-59页 |
| 4 NtCBK1与CaM kd常数的测定 | 第59-60页 |
| 5 NtCBK2钙调素结合区的分析 | 第60-61页 |
| 6 NtCBK2与CaM kd常数的测定 | 第61-63页 |
| 第三节 烟草钙调素结合蛋白激酶的生化特性分析 | 第63-88页 |
| 一 材料和方法 | 第66-75页 |
| 1 表达载体的构建 | 第66-70页 |
| 2 重组杆状质粒转化sf-9昆虫细胞 | 第70页 |
| 3 重组病毒的收获和感染昆虫细胞 | 第70页 |
| 4 融合蛋白的表达和纯化 | 第70-73页 |
| 5 烟草钙调素在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第73页 |
| 6 NtCBKs的自磷酸化分析 | 第73-74页 |
| 7 底物磷酸化反匝 | 第74页 |
| 8 激酶活性分析 | 第74页 |
| 9 去磷酸化对激酶活性的影响 | 第74页 |
| 10 毛细管电泳分析磷酸化的氨基酸 | 第74-75页 |
| 二 结果和讨论 | 第75-88页 |
| (一) NtCBK1酶学特性分析 | 第75-82页 |
| 1 NtCaMs 的纯化 | 第75-76页 |
| 2 NtCBK1蛋白的纯化 | 第76页 |
| 3 NtCBK1全蛋白活性分析 | 第76-78页 |
| 4 NtCBK1缺失蛋白酶活分析 | 第78-79页 |
| 5 不同的反应条件下对NtCBK1磷酸化活性的影响 | 第79-80页 |
| 6 磷酸化氨基酸的分析 | 第80-82页 |
| (二) NtCBK2酶学特性分析 | 第82-88页 |
| 1 NtCBK2蛋白的纯化 | 第82页 |
| 2 NtCBK2全蛋白活陸分析 | 第82-84页 |
| 3 NtCBK2全蛋白去磷酸化后酶活分析 | 第84-85页 |
| 4 NtCBK2缺失蛋白酶活分析 | 第85页 |
| 5 不同的反应条件下对NtCBK2磷酸化活性的影响 | 第85-86页 |
| 6 磷酸化氨基酸的分析 | 第86-88页 |
| 第三章 NtCBK1基因表达的研究 | 第88-111页 |
| 摘要 | 第88-91页 |
| 第一节 各种处理条件下NtCBK1基因的表达 | 第91-96页 |
| 一 材料与方法 | 第91-94页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第91页 |
| 2 各种处理方法 | 第91页 |
| 3 总RNA的提取 | 第91页 |
| 4 RNA甲醛变性电泳 | 第91-92页 |
| 5 杂交探针的标记 | 第92页 |
| 6 Northern blot分析 | 第92-94页 |
| 二 实验结果和讨论 | 第94-96页 |
| 1 冷处理4℃和热处理42℃对NtCBK1基因表达的影响 | 第94页 |
| 2 高盐，干旱，ABA处理对NtCBK1基因表达的影响 | 第94-95页 |
| 3 NAA，GA处理对NtCBK1基因表达的影响 | 第95-96页 |
| 第二节 Northern杂交和原位杂交分析NtCBK1的表达 | 第96-103页 |
| 一 材料和方法 | 第96-100页 |
| 1 实验材料 | 第96页 |
| 2 组织材料的固定和切片 | 第96页 |
| 3 探针的制备 | 第96-97页 |
| 4 杂交 | 第97-99页 |
| 5 免疫反应 | 第99页 |
| 6 显色反应 | 第99页 |
| 7 封片观察 | 第99-100页 |
| 二 结果和讨论 | 第100-103页 |
| 1 Northern杂交结果 | 第100-101页 |
| 2 原位杂交结果 | 第101-103页 |
| 第三节 以GFP为报告基因研究NtCBK1基因的表达分布 | 第103-111页 |
| 一 材料和方法 | 第103-107页 |
| 1 启动子的扩增 | 第103页 |
| 2 载体的构建及重纽质粒转化农杆菌 | 第103-105页 |
| 3 重组质粒转化农杆菌 | 第105-106页 |
| 4 农杆菌转化烟草(叶盘法) | 第106-107页 |
| 5 转化烟草的荧光观察 | 第107页 |
| 二 结果和讨论 | 第107-111页 |
| 1 重组载体的鉴定 | 第107-109页 |
| 2 转pPNtCBK1:GFP基因植株筛选和鉴定 | 第109页 |
| 3 转pPNtCBK1:GFP基因植株中叶芽荧光的分布 | 第109-111页 |
| 第四章 转基因探讨NtCBK1在烟草发育中的作用 | 第111-121页 |
| 摘要 | 第111-113页 |
| 一 材料与方法 | 第113-114页 |
| 1 材料 | 第113页 |
| 2 载体的构建 | 第113页 |
| 3 重组质粒转化农杆菌及农杆菌转化烟草(叶盘法) | 第113页 |
| 4 Northern杂交 | 第113页 |
| 5 Southern杂交 | 第113-114页 |
| 6 组织切片 | 第114页 |
| 7 原位杂交 | 第114页 |
| 二 结果和讨论 | 第114-121页 |
| 1 转基因表型的观察 | 第114-115页 |
| 2 转基因株系的杂交分析 | 第115-117页 |
| 3 去甲基化处理对开花时间的影响 | 第117页 |
| 4 探讨NFL与NtCBK1表达的相关性 | 第117-118页 |
| 5 转基因植株叶芽形态的观察和基因表达的检测 | 第118-119页 |
| 6 NtCBK1功能的分析 | 第119-121页 |
| 第五章 总讨论 | 第121-126页 |
| 1 植物钙信号系统中的钙调素结合蛋白激酶的分类 | 第121-123页 |
| 2 植物钙调素结合蛋白激酶的基因表达和功能分析 | 第123-125页 |
| 3 展望 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-143页 |
| 在读期间发表与按稿论文 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
