| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 表格目录 | 第12-13页 |
| 图片目录 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-28页 |
| 1 酿酒酵母的研究优势 | 第14-16页 |
| ·酿酒酵母是一种重要的真核模式生物 | 第14-15页 |
| ·以酿酒酵母作为模式生物的研究意义 | 第15-16页 |
| 2 酿酒酵母的纺锤体极体 | 第16-21页 |
| ·SPB的结构 | 第16-17页 |
| ·SPB的复制与细胞周期 | 第17-19页 |
| ·SPB的关键蛋白组分 | 第19-20页 |
| ·影响SPB功能的重要调控蛋白 | 第20-21页 |
| 3 酿酒酵母纺锤体极体蛋白组分Sfi1p | 第21-23页 |
| 4 酿酒酵母Sfi1p的研究进展 | 第23-25页 |
| 5 本课题的研究思路 | 第25-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-48页 |
| 1 实验材料 | 第28-36页 |
| ·质粒,菌株与引物 | 第28-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-31页 |
| ·药品与试剂 | 第31-34页 |
| ·主要药品 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32-34页 |
| ·培养基 | 第34-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-48页 |
| ·菌种的培养与保存 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞Top10的制备与转化 | 第36-38页 |
| ·CTAB法提取质粒DNA | 第38-39页 |
| ·DNA的限制性内切酶消化 | 第39页 |
| ·DNA的纯化 | 第39-40页 |
| ·酚抽提纯化DNA | 第40-41页 |
| ·线性DNA的去磷酸化 | 第41页 |
| ·DNA的连接反应 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳验证方法 | 第42页 |
| ·常规PCR扩增技术 | 第42-43页 |
| ·融合PCR技术 | 第43-44页 |
| ·错误倾向PCR技术 | 第44页 |
| ·酵母细胞的快速转化法 | 第44-45页 |
| ·PCR法验证酵母交配型 | 第45页 |
| ·HO质粒法构建二倍体细胞 | 第45页 |
| ·酵母高效产孢法 | 第45-46页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证方法 | 第46-48页 |
| 第三章 酿酒酵母Sfi1保守多肽肽库的构建与分析 | 第48-73页 |
| 1 实验材料与方法 | 第50-59页 |
| ·Sfi1保守多肽的同源分析 | 第50-51页 |
| ·Sfi1保守多肽中关键氨基酸的特点分析 | 第50页 |
| ·Sfi1保守多肽的二级结构分析 | 第50-51页 |
| ·Sfi1p 20~(th)保守多肽中特定氨基酸突变的结构与功能分析 | 第51-56页 |
| ·Sfi1p-L763随机突变的同源模拟 | 第51-52页 |
| ·SFI1-W763和SFI1-M763基因序列的扩增 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pYD1-W763和pYD1-M763的构建及其鉴定 | 第53-54页 |
| ·Sfi1多肽在酵母中的诱导表达与检测 | 第54-55页 |
| ·Sfi1p与Cde31p的相互作用与检测 | 第55页 |
| ·Sfi1p的流式细胞周期及DNA含量的检测 | 第55页 |
| ·Sfi1p突变对酵母细胞生长的影响 | 第55-56页 |
| ·酿酒酵母Sfi120~(th)保守多肽中随机氨基酸突变的肤库的建立 | 第56-59页 |
| ·多肽编码基因库的建立 | 第56-57页 |
| ·多肽表达载体库pYD1-S20的构建 | 第57-58页 |
| ·多肽表达菌株库的构建 | 第58页 |
| ·Sifl多肽肽库的构建 | 第58页 |
| ·Sfil随机突变多肽与Cdc31p的相互作用与检测 | 第58-59页 |
| 2 实验结果 | 第59-70页 |
| ·Sfi1保守多肽的同源分析 | 第59-60页 |
| ·Sfi1保守多肽中关键氨基酸的特点分析 | 第59页 |
| ·Sfi1保守多肽的二级结构分析 | 第59页 |
| ·Sfi1第20个保守多肽的特点 | 第59-60页 |
| ·Sfi1p 20~(th)保守多肽中特定氨基酸突变的结构与功能分析 | 第60-67页 |
| ·Sfi1p-L763氨基酸随机突变的三维结构的拟合 | 第60页 |
| ·SFI1-W763和SFI1-M763基因序列的扩增结果验证 | 第60页 |
| ·重组载体pYD1-W763和pYD1-M763的酶切验证 | 第60-61页 |
| ·SFI1-W763和SFI1-M763基因序列和相应的氨基酸序列比对 | 第61-62页 |
| ·中心体蛋白Cdc31p诱导表达的SDS-PAGE验证 | 第62-63页 |
| ·野生型Sfi1多肽体外表达的SDS-PAGE检测 | 第63-64页 |
| ·突变型Sfi1多肽体外表达的SDS-PAGE检测 | 第64-65页 |
| ·Sfi1多肽与Cdc31p相互作用结果检测 | 第65-66页 |
| ·野生型Sfi1多肽和突变型Sfi1多肽的流式细胞周期检测 | 第66-67页 |
| ·Sfi1p突变对酵母细胞有丝分裂的影响 | 第67页 |
| ·酿酒酵母Sfi120~(th)保守多肽中随机氨基酸突变的肽库的建立 | 第67-70页 |
| ·错误倾向PCR产物的琼脂糖凝胶电泳验证 | 第67-68页 |
| ·重组载体pYD1-S20的酶切验证 | 第68页 |
| ·Sfi1随机突变多肽与Cdc31p相互作用结果检测 | 第68-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 酿酒酵母Sfi1p磷酸化多肽的体外表达与分析 | 第73-84页 |
| 1 实验材料与方法 | 第73-75页 |
| ·SFI1氨基端和羧基端基因序列的扩增 | 第73-74页 |
| ·重组质粒pET-SN和pET-SC的构建与鉴定 | 第74页 |
| ·Sfi1p磷酸化多肽在大肠杆菌中的诱导表达 | 第74-75页 |
| 2 实验结果 | 第75-82页 |
| ·重组载体pET-SN和pET-SC的构建示意图 | 第75页 |
| ·SFI1氨基端和羧基端基因序列的扩增验证 | 第75-76页 |
| ·重组载体pET-SN和pET-SC的酶切验证 | 第76-77页 |
| ·SFI1-N端和SFI1-C端基因的测序比对 | 第77-79页 |
| ·Sfi1p-N端和Sfi1p-C端编码氨基酸的序列比对 | 第79-80页 |
| ·Sfi1磷酸化多肽体外诱导表达条件的优化 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 结论与展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
| 获得学士、硕士学位的学校、时间 | 第90页 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
