| 引言 | 第1-12页 |
| 研究内容 | 第12-45页 |
| 实验一: 猪内源性反转录病毒在巴马小型猪中的存在与表达 | 第12-24页 |
| 1 材料与方法 | 第12-16页 |
| ·实验材料 | 第12-13页 |
| ·主要仪器 | 第13页 |
| ·外周血淋巴细胞的分离 | 第13页 |
| ·PBL DNA的制备 | 第13页 |
| ·PBL总RNA的制备 | 第13-14页 |
| ·引物的设计与合成 | 第14页 |
| ·PCR检测基因组DNA中PERV前病毒的存在 | 第14-15页 |
| ·RT-PCR检测RNA中PERV的表达 | 第15-16页 |
| ·PCR和RT-PCR分型检测 | 第16页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第16页 |
| 2 结果 | 第16-22页 |
| ·PCR检测结果 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第17-19页 |
| ·分型结果 | 第19-22页 |
| 3 讨论 | 第22-23页 |
| 4 小结 | 第23-24页 |
| 实验二: 巴马小型猪来源的猪内源性反转录病毒在体外对人HEK293细胞的感染 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·普通培养基 | 第25页 |
| ·选择性培养基 | 第25页 |
| ·胰蛋白酶消化液 | 第25页 |
| ·细胞的准备 | 第25-26页 |
| ·细胞的共培养 | 第26页 |
| ·巴马小型猪外周血淋巴细胞的分离和共培养 | 第26页 |
| ·共培养细胞的压力筛选 | 第26页 |
| ·筛选后的细胞基因组DNA和总RNA的制备 | 第26-27页 |
| ·细胞基因组DNA的制备 | 第26-27页 |
| ·细胞总RNA的制备 | 第27页 |
| ·检测共培养细胞中的猪源细胞 | 第27-28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·感染细胞的鉴定 | 第28页 |
| ·PCR鉴定 | 第28页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-32页 |
| ·G418抗性293细胞与PBL细胞的共培养 | 第28-29页 |
| ·筛选后的细胞 | 第29页 |
| ·正常的HEK293抗性细胞 | 第29-30页 |
| ·压力筛选结果 | 第30页 |
| ·HEK293细胞感染PERV的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·HEK293细胞感染PERV的RT-PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 实验三: 巴马小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆与序列分析 | 第34-45页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第34-35页 |
| ·RNA的制备 | 第35页 |
| ·RT-PCR扩增env全基因 | 第35-36页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第36页 |
| ·DAN片段的连接 | 第36-37页 |
| ·E.coli感受态的制备 | 第37页 |
| ·外源DNA的转化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38页 |
| ·质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| 2 结果 | 第39-43页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第39页 |
| ·克隆质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列分析 | 第40-42页 |
| ·全基因序列 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 作者简介 | 第50-51页 |
| 英文缩略词表 | 第51页 |
