| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩写词 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-28页 |
| 1 多花水仙花色品种概况 | 第16页 |
| 2 植物类胡萝卜素生物合成途径的研究 | 第16-21页 |
| ·植物类胡萝卜素生物合成途径 | 第17-18页 |
| ·植物类胡萝卜素合成途径调控机制的相关研究 | 第18-19页 |
| ·调节植物类胡萝卜素合成途径改变花色 | 第19-20页 |
| ·中国水仙类胡萝卜素生物合成途径相关基因的研究 | 第20-21页 |
| 3 植物呈色差异的分子机理研究进展 | 第21-25页 |
| ·可变剪切 | 第22页 |
| ·基因差异表达 | 第22-23页 |
| ·启动子区域突变 | 第23页 |
| ·转录因子调控 | 第23-24页 |
| ·内含子 | 第24-25页 |
| 4 实时荧光定量PCR的原理及基因表达的研究 | 第25-27页 |
| ·实时荧光定量PCR的原理 | 第25页 |
| ·基因表达研究 | 第25-27页 |
| 5 本研究的科学意义、研究内容 | 第27-28页 |
| ·本研究的科学意义 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 多花水仙三种花色类型PSY基因的克隆及生物信息学分析 | 第28-44页 |
| 1 试验材料 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·试剂、酶、菌株和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·耗材和仪器设备 | 第29页 |
| ·引物合成 | 第29页 |
| 2 试验方法 | 第29-32页 |
| ·多花水仙总RNA的提取、检测和逆转录 | 第29-30页 |
| ·多花水仙花朵（花瓣、副冠）总RNA的提取 | 第29页 |
| ·凝胶电泳分析和紫外分光光度测定 | 第29页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| ·多花水仙DNA的提取、检测 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·目的片段的回收和连接 | 第31页 |
| ·目的片度的回收 | 第31页 |
| ·目的片度连接载体 | 第31页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备、转化和阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备、转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·序列拼接及生物学信息学分析 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·多花水仙盛花期的总RNA、DNA质量 | 第32-33页 |
| ·三种花色类型PSY基因cDNA的ORF克隆及分析 | 第33-39页 |
| ·三种花色类型PSY基因的ORF获得及编码产物同源性分析 | 第33-36页 |
| ·三种花色类型的PSY蛋白一级结构分析 | 第36-37页 |
| ·三种花色类型的PSY蛋白二级结构分析 | 第37-39页 |
| ·三种花色类型PSY基因ORF区域的DNA克隆及分析 | 第39-41页 |
| ·三种花色类型PSY的基因组全长拼接 | 第39-40页 |
| ·三种花类型PSY基因的内含子序列分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| ·RNA的质量 | 第41页 |
| ·推测多花水仙PSY基因的拷贝数 | 第41-42页 |
| ·多花水仙PSY基因的进化关系 | 第42页 |
| ·不同花色类型PSY基因的差异 | 第42-44页 |
| 第三章 多花水仙三种花色类型PDS基因的克隆及生物信息学分析 | 第44-56页 |
| 1 试验材料 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-53页 |
| ·多花水仙盛花期的总RNA、DNA质量 | 第45-46页 |
| ·三种花色类型PDS基因cDNA的ORF克隆及分析 | 第46-51页 |
| ·三种花色类型PDS基因的ORF获得及编码产物同源性分析 | 第46-49页 |
| ·三种花色类型的PDS蛋白一级结构分析 | 第49-50页 |
| ·三种花色类型的PDS蛋白二级结构分析 | 第50-51页 |
| ·三种花色类型PDS基因ORF区域的部分DNA克隆及分析 | 第51-53页 |
| ·三种花色类型PDS的部分基因组序列 | 第51-52页 |
| ·三种花色类型PDS基因的内含子序列分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| ·多花水仙PDS编码区内DNA序列的克隆方法 | 第53-54页 |
| ·多花水仙PDS的基因差异 | 第54-56页 |
| 第四章 多花水仙三种花色类型ZDS基因的克隆及生物信息学分析 | 第56-68页 |
| 1 试验材料 | 第56页 |
| 2 试验方法 | 第56-57页 |
| ·引物设计 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-66页 |
| ·多花水仙盛花期的总RNA、DNA质量 | 第57-58页 |
| ·三种花色类型ZDS基因cDNA的ORF克隆及分析 | 第58-63页 |
| ·三种花色类型ZDS基因的ORF获得及编码产物同源性分析 | 第58-60页 |
| ·三种花色类型的ZDS蛋白一级结构分析 | 第60-62页 |
| ·三种花色类型的ZDS蛋白二级结构分析 | 第62-63页 |
| ·三种花色类型ZDS基因ORF区域的DNA克隆及分析 | 第63-66页 |
| ·三种花色类型ZDS的部分基因组序列 | 第63-65页 |
| ·三种花色类型ZDS基因的内含子序列分析 | 第65-66页 |
| ·差异内含子的分析 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| ·多花水仙ZDS编码区内DNA序列的分段克隆 | 第66-67页 |
| ·多花水仙ZDS基因在花色差异中的可能作用机制 | 第67-68页 |
| 第五章 多花水仙三种花色类型LCY-β基因的克隆及生物信息学分析 | 第68-76页 |
| 1 试验材料 | 第68页 |
| 2 试验方法 | 第68-69页 |
| ·引物设计 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-74页 |
| ·多花水仙盛花期的总RNA、DNA质量 | 第69页 |
| ·三种花色类型LCY-β基因cDNA的ORF克隆及分析 | 第69-74页 |
| ·三种花色类型LCY-β基因的ORF获得及编码产物同源性分析 | 第69-71页 |
| ·三种花色类型的LCY-β蛋白一级结构分析 | 第71-73页 |
| ·三种花色类型的LCY-β蛋白二级结构分析 | 第73-74页 |
| ·三种花色类型LCY-β基因ORF区域的DNA克隆及分析 | 第74页 |
| ·三种花色类型LCY-β的基因组全长拼接 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 多花水仙三种花色类型LCY-ε基因的克隆及分析 | 第76-88页 |
| 1 试验材料 | 第76页 |
| 2 试验方法 | 第76-78页 |
| ·多花水仙总RNA的提取、检测和逆转录 | 第76-77页 |
| ·金盏银台的总RNA5′-RACEcDNA合成 | 第76-77页 |
| ·金盏银台LCY-ε基因5′-RACE的克隆 | 第77页 |
| ·引物合成 | 第77页 |
| ·PCR扩增 | 第77页 |
| ·多花水仙三种花色类型LCY-εORF的克隆 | 第77-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-86页 |
| ·多花水仙盛花时期的总RNA质量 | 第78页 |
| ·金盏银台LCY-ε基因的cDNA5′RACE的克隆与序列分析 | 第78-79页 |
| ·金盏银台LCY-ε基因cDNA全长的获得与序列分析 | 第79-80页 |
| ·三种花色类型LCY-ε基因的开放阅读框(ORF)扩增 | 第80-86页 |
| ·三种花色类型的LCY-ε蛋白一级结构分析 | 第83-84页 |
| ·三种花色类型的LCY-ε蛋白二级结构分析 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 第七章 多花水仙花色形成中PSY、PDS、ZDS和LCY-β的qRT-PCR分析 | 第88-102页 |
| 1 试验材料 | 第88-89页 |
| ·植物材料 | 第88页 |
| ·主要试剂盒和仪器 | 第88页 |
| ·引物合成 | 第88-89页 |
| 2 试验方法 | 第89-91页 |
| ·多花水仙总RNA的提取、检测 | 第89页 |
| ·两步法实时定量PCR | 第89-90页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第89页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第89-90页 |
| ·引物设计 | 第90-91页 |
| 3 结果与分析 | 第91-98页 |
| ·多花水仙不同时期的花朵（花瓣和副冠）总RNA质量 | 第91页 |
| ·实时荧光PCR扩增内参基因和目的基因的参数分析 | 第91-94页 |
| ·金盏银台的标准曲线 | 第91-92页 |
| ·金盏银台的动力学曲线、融解曲线 | 第92-94页 |
| ·多花水仙花色形成中相关基因的差异表达 | 第94-98页 |
| ·多花水仙花色形成中PSY基因的转录水平 | 第94-95页 |
| ·多花水仙花色形成中PDS基因的转录水平 | 第95-96页 |
| ·多花水仙花色形成中ZDS基因的转录水平 | 第96-97页 |
| ·多花水仙花色形成中LCY-β基因的转录水平 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-102页 |
| ·qRT-PCR方法的选择 | 第98页 |
| ·多花水仙花色形成中部分基因的差异表达 | 第98-100页 |
| ·试验材料选择 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 附录1 多花水仙三种花色类型的不同发育时期 | 第112-113页 |
| 附录2 多花水仙PSYcDNA和DNA的序列比对结果 | 第113-117页 |
| 附录3 多花水仙ZDS基因的内含子C序列比对结果 | 第117-118页 |
| 附录4 多花水仙ZDS基因的内含子F序列比对 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
