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超表达cyp71av1和cpr基因对黄花蒿青蒿素生物合成的影响

摘要第1-8页
Abstract第8-11页
第一章 文献综述第11-25页
   ·青蒿素与疟疾第11-15页
     ·疟疾介绍第11页
     ·青蒿素介绍第11-13页
     ·黄花蒿介绍第13-14页
     ·黄花蒿腺毛体-青蒿素合成、分泌、存储的场所第14-15页
   ·黄花蒿中的部分次生代谢产物分析第15-16页
     ·青蒿素衍生物第15页
   ·黄花蒿中挥发性次生代谢产物第15页
     ·黄花蒿中的非挥发性次生代谢产物第15-16页
     ·黄花蒿中几种次生代谢产物的化学结构式第16页
   ·青蒿素生物合成代谢途径第16-22页
     ·青蒿素生物合成上游途径(MVA和MEP途径)第16-18页
     ·青蒿素生物合成下游途径第18-19页
     ·黄花蒿中已获得的转基因成果第19-22页
   ·影响黄花蒿中青蒿素含量的因素第22-25页
第二章 绪论第25-29页
   ·研究的目的和意义第25-26页
   ·研究的内容和范围第26页
   ·本研究的技术路线第26-29页
第三章 LBA4404-pCAMBIA1304~+cyp71av1-cpr高效植物表达载体的构建第29-39页
   ·实验材料及试剂第29-30页
     ·植物材料第29页
     ·菌株和质粒第29页
     ·仪器设备第29页
     ·试剂及试剂盒第29-30页
   ·常规实验方法和步骤第30-34页
     ·总RNA的提取与检测第30-31页
     ·目的条带的回收第31页
     ·连接反应第31页
     ·CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞的第31-32页
     ·连接产物或重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞第32页
     ·质粒的提取第32-33页
     ·重组子的鉴定、测序第33页
     ·农杆菌LBA4404感受态的制备(CaCl_2法)第33页
     ·重组质粒转化感受态农杆菌第33-34页
     ·RNA反转录成cDNA第34页
   ·pCAMBIA1304~+-cyp71av1-cpr高效植物表达载体的构建及工程菌的获得第34-39页
     ·植物总RNA提取第34-35页
     ·引物设计第35页
     ·pCAMBIA1304~+构建第35-36页
     ·pCAMBIA1304~+cyp71av1-cpr载体构建第36-38页
     ·农杆菌工程菌的获得第38-39页
第四章 转基因黄花蒿的获得及分析第39-53页
   ·实验材料和常规方法步骤第39-40页
     ·实验材料及仪器设备第39页
     ·常规方法及步骤第39-40页
   ·工程菌遗传转化黄花蒿第40-42页
     ·黄花蒿无菌苗的获得第40页
     ·工程菌两次活化第40-41页
     ·工程菌侵染黄花蒿第41页
     ·暗培养第41页
     ·抗性筛选培养第41页
     ·生根培养第41页
     ·黄花蒿炼苗第41页
     ·黄花蒿田间试验第41-42页
   ·转基因黄花蒿鉴定第42-43页
   ·青蒿素含量测定第43页
     ·青蒿素提取第43页
     ·HPLC-ELSD测定青蒿素含量第43页
   ·荧光定量PCR测定cyp71av1、cpr和β-actin基因的表达量第43-45页
   ·结果与分析第45-50页
     ·转基因黄花蒿的检测和鉴定第45页
     ·LBA4404-pCAMBIA13O4~+-cyp71av1-cpr对黄花蒿的遗传转化第45-46页
     ·转cyp71av1和cpr基因黄花蒿青蒿素含量分析第46-48页
     ·cyp71av1和cpr基因表达量分析第48-50页
   ·结论和展望第50-53页
参考文献第53-57页
附录第57-63页
 附录A:实验室常用培养基和抗生素配置第57-59页
 附录B:发表论文情况第59-61页
 附录C:缩略词第61-63页
致谢第63页

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