TRAIL的基因克隆及其表达条件优化研究
| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 材料与方法 | 第13-29页 |
| 1 菌种和质粒 | 第13页 |
| 2 主要试剂 | 第13-14页 |
| 3 培养基和主要溶液 | 第14-16页 |
| 4 主要设备与器材 | 第16-17页 |
| 5 人可溶性TRAIL的基因克隆 | 第17-21页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第17-18页 |
| ·碱裂解法抽提质粒pET-28a | 第18页 |
| ·PCR产物及质粒的酶切 | 第18-19页 |
| ·酶切产物割胶回收 | 第19页 |
| ·目的DNA片段与质粒的连接 | 第19-20页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·转化 | 第20-21页 |
| ·转化子的鉴定 | 第21页 |
| 6 人可溶性TRAIL的表达及鉴定 | 第21-24页 |
| ·人可溶性TRAIL的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第22-23页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第23页 |
| ·Western blot鉴定 | 第23-24页 |
| 7 人可溶性TRAIL表达条件的优化 | 第24-27页 |
| ·Plackett-Burman实验 | 第24-25页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第25页 |
| ·中心组合实验 | 第25页 |
| ·验证实验 | 第25-26页 |
| ·高密度发酵方法及参数测定 | 第26-27页 |
| ·数据分析 | 第27页 |
| 8 目的蛋白的纯化及性质鉴定 | 第27-29页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第27页 |
| ·纯度鉴定—反向HPLC | 第27页 |
| ·分子量鉴定—ESI质谱 | 第27-28页 |
| ·体外活性测定 | 第28-29页 |
| 结果与分析 | 第29-42页 |
| 1 人可溶性TRAIL的基因克隆 | 第29-31页 |
| ·人可溶性TRAIL PCR扩增结果 | 第29页 |
| ·重组质粒构建结果 | 第29-31页 |
| 2 人可溶性TRAIL的表达及鉴定 | 第31-32页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·Western blot结果 | 第32页 |
| 3 人可溶性TRAIL表达条件的优化 | 第32-39页 |
| ·Plackett-Burman实验结果 | 第32-34页 |
| ·最陡坡试验结果 | 第34页 |
| ·中心组合实验和响应面分析 | 第34-38页 |
| ·验证实验 | 第38页 |
| ·高密度发酵 | 第38-39页 |
| 4 目的蛋白的纯化及性质鉴定 | 第39-42页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第39页 |
| ·纯度鉴定 | 第39-40页 |
| ·分子量鉴定 | 第40-41页 |
| ·体外活性测定 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-47页 |
| 1 人TRAIL基因的克隆及表达鉴定 | 第42-43页 |
| 2 响应面法优化目的蛋白表达条件 | 第43-44页 |
| 3 高密度发酵 | 第44-45页 |
| 4 目的蛋白的纯化及性质鉴定 | 第45-47页 |
| 综述 | 第47-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
