| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-43页 |
| ·材料与试剂 | 第19-26页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要试剂配制 | 第20-26页 |
| ·亚洲璃眼蜱的实验室饲养 | 第26页 |
| ·亚洲璃眼蜱总RNA 的提取及鉴定 | 第26-27页 |
| ·总RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·RNA 浓度测定 | 第27页 |
| ·RNA 变性凝胶电泳 | 第27页 |
| ·亚洲璃眼蜱HBP 基因EST 序列的获取 | 第27页 |
| ·亚洲璃眼蜱HBP 基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·3’RACE 法克隆目的基因的3’端缺失序列 | 第27-30页 |
| ·5’RACE 法克隆目的基因的5’末端 | 第30-33页 |
| ·亚洲璃眼蜱HBP 基因全长的克隆 | 第33页 |
| ·RT-PCR 分析 HBP 基因的体内表达特点及分布情况 | 第33-35页 |
| ·HBP 基因表达的性别特异性分析 | 第33-34页 |
| ·HBP 基因在蜱体各解剖部位的表达分析 | 第34页 |
| ·HBP 基因在蜱的各发育阶段的表达分析 | 第34-35页 |
| ·亚洲璃眼蜱组胺结合蛋白基因的原核表达 | 第35-38页 |
| ·pGEX-4T-1 质粒的提取 | 第35页 |
| ·目的基因引入双酶切位点 | 第35-36页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒转化宿主菌BL21（DE3） | 第37页 |
| ·IPTG 诱导的时相表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第38-40页 |
| ·蛋白质表达形式分析 | 第38页 |
| ·蛋白质纯化 | 第38-40页 |
| ·Western blotting 分析蛋白质免疫原性 | 第40-41页 |
| ·制备抗血清 | 第40页 |
| ·Western blotting 分析 | 第40-41页 |
| ·HBP 结合 Histamine 的活性分析 | 第41-43页 |
| ·具体操作步骤 | 第41-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-57页 |
| ·亚洲璃眼蜱的饲养 | 第43页 |
| ·亚洲璃眼蜱总RNA 的提取 | 第43页 |
| ·EST 序列获取及序列分析 | 第43-44页 |
| ·HaHBP 基因3'末端的克隆 | 第44-45页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第44页 |
| ·3'末端测序结果 | 第44-45页 |
| ·目的基因5`端的克隆 | 第45-46页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第45-46页 |
| ·测序结果 | 第46页 |
| ·HaHBP 全长基因的克隆 | 第46-50页 |
| ·H aHBP 全长基因的克隆 | 第46-50页 |
| ·HaHBP 基因在蜱体发育阶段和不同部位的表达分析 | 第50-51页 |
| ·基因的原核表达 | 第51-54页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·HaHBP 的诱导表达 | 第52-54页 |
| ·重组蛋白浓度的测定 | 第54页 |
| ·Western-blot 分析 | 第54-55页 |
| ·HBP 的活性分析 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-61页 |
| ·亚洲璃眼蜱的实验室饲养 | 第57页 |
| ·亚洲璃眼蜱的总 RNA 提取及检测 | 第57页 |
| ·RACE 方法克隆 HBP 基因全长 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR 方法对 HBP 基因表达情况分析 | 第58页 |
| ·外源基因在E.coli 中的表达 | 第58-59页 |
| ·ELISA-Histamine 方法检测 HBP 活性分析 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
