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超量表达谷氨酰胺合成酶、硝酸根转运蛋白和铵离子转运蛋白家族1基因对水稻氮代谢的功能研究

缩写名词表第1-11页
摘要第11-13页
Abstract第13-16页
前言第16-17页
1 文献综述第17-41页
   ·植物体内氮的营养特征第17-19页
     ·植物体内氮的含量和分布第17页
     ·植物体内氮的生理功能第17-18页
     ·氮对植物光合作用的影响第18-19页
   ·植物对氮的吸收和利用第19-27页
     ·植物对氮的吸收第19-23页
       ·共生固氮第20页
       ·植物通过根部从土壤中吸收氮第20-23页
     ·植物对氮的利用第23-27页
       ·NO_3~-的还原第23-25页
       ·NH_4~+的同化第25-27页
   ·植物谷氨酰胺合成酶(GS)的研究概况第27-33页
     ·谷氨酰胺合成酶与其相关基因第27-28页
     ·谷氨酰胺合成酶的生化性质第28页
     ·谷氨酰胺合成酶的反应途径与功能第28-29页
     ·谷氨酰胺合成酶的基因表达调节第29-30页
     ·谷氨酰胺合成酶介导的碳氮平衡第30-31页
     ·谷氨酰胺合成酶转基因植物的研究现状第31-33页
   ·植物基因功能研究的策略和方法第33-39页
     ·基因功能丧失或减少第34-38页
       ·插入突变第34-35页
       ·反义抑制和共抑制第35-36页
       ·RNA干扰第36-38页
     ·基因功能增加第38-39页
       ·基因的超量表达第39页
       ·基因的诱导表达第39页
   ·农杆菌介导的遗传转化系统和抗性标记基因的使用第39-40页
   ·本研究的目的和意义第40-41页
2 材料与方法第41-58页
   ·实验所用的水稻材料和菌株第41-42页
   ·遗传转化的基因片段第42页
   ·载体的构建和遗传转化第42-47页
     ·骨架载体的构建第42页
     ·超量表达载体的构建第42-44页
     ·RNAi抑制表达载体的构建第44-46页
     ·基因启动子融合GFP载体的构建第46页
     ·基因的遗传转化第46-47页
   ·DNA的提取、转基因植株的阳性检测及转基因拷贝数的检测第47-49页
     ·DNA的提取第47-48页
     ·转基因植株的阳性检测第48页
     ·转基因拷贝数的Southern检测第48-49页
   ·RNA的抽提、反转录及表达量的检测第49页
     ·RNA的抽提第49页
     ·转基因表达量的RT-PCR和Northern检测第49页
   ·转基因植株的种植和性状考察第49-50页
     ·水培试验和性状考察第49-50页
     ·田间试验和性状考察第50页
   ·转基因植株生理生化指标的测定第50-56页
     ·谷氨酰胺合成酶活性的测定第50-51页
     ·水溶性蛋白含量的测定第51-53页
     ·游离NO_3~-含量的测定第53-54页
     ·游离NH_4~+含量的测定第54-55页
     ·游离氨基酸含量的测定第55页
     ·总氮含量的测定第55页
     ·总氨基酸含量/籽粒氨基酸含量的测定第55-56页
     ·叶片叶绿素含量的测定第56页
   ·转基因植株的非生物胁迫试验和性状考察第56-58页
     ·Basta胁迫试验第56-57页
     ·高浓度NaCl胁迫试验第57页
     ·冷胁迫试验第57页
     ·干旱胁迫试验第57-58页
     ·ABA敏感性试验第58页
     ·体外添加Gln培养试验第58页
3 结果与分析第58-98页
   ·超量表达GS1;1、GS1;2和glnA转基因植株的获得与功能分析第58-73页
     ·转基因植株的获得与鉴定第58-62页
       ·基因片段的获得与转化载体的构建第58-59页
       ·转基因植株的获得与鉴定第59-62页
     ·转基因植株的生理生化指标的分析第62-68页
       ·转基因植株谷氨酰胺合成酶活性的测定分析第62页
       ·转基因植株水溶性蛋白含量的测定分析第62-63页
       ·转基因植株游离NH_4~+、游离NO_3~-和游离氨基酸含量的测定分析第63-65页
       ·转基因植株总氮和总氨基酸含量的测定分析第65-67页
       ·转基因植株的经济产量及籽粒氨基酸含量的测定分析第67-68页
     ·转基因植株的非生物胁迫试验第68-73页
       ·转基因植株的Basta抗性筛选试验第69页
       ·转基因植株的高浓度NaCl胁迫试验第69-71页
       ·转基因植株的冷胁迫试验第71页
       ·转基因植株的干旱胁迫和ABA敏感性试验第71-73页
   ·超量表达GS2转基因植株的获得与功能分析第73-87页
     ·转基因植株的获得与鉴定第73-75页
       ·基因片段的获得与转化载体的构建第73页
       ·转基因植株的获得与鉴定第73-75页
     ·转基因植株的表型与生物产量的分析第75-76页
     ·转基因黄化植株的生理生化指标的分析第76-82页
       ·转基因黄化植株谷氨酰胺合成酶活性的测定分析第76-78页
       ·转基因黄化植株水溶性蛋白含量的测定分析第78页
       ·转基因黄化植株游离NH_4~+和游离氨基酸含量的测定分析第78-82页
     ·转基因黄化植叶绿素含量的测定分析第82-84页
       ·不同生育期叶片叶绿素含量的测定分析第82页
       ·不同叶龄叶片叶绿素含量的测定分析第82-84页
     ·转基因黄化植株叶绿素合成途径及光呼吸途径相关基因表达分析第84-86页
     ·转基因黄化植株体外添加Gln的试验第86-87页
   ·超量表达GS1;3、NRT2、AMT1;1、AMT1;2和AMT1;3转基因植株的获得与功能分析第87-95页
     ·转基因植株的获得与鉴定第87-91页
       ·基因片段的获得与转化载体的构建第87-88页
       ·转基因植株的获得与鉴定第88-91页
     ·转基因植株生长表型和生物产量的分析第91-92页
     ·超量表达AMT1;3植株NH_4~+含量的测定分析第92-94页
     ·超量表达AMT1;3植株相关基因表达分析第94-95页
   ·RNAi抑制表达以及启动子融合GFP蛋白的转基因植株的获得与分析第95-98页
     ·RNAi抑制表达的转基因植株的获得与鉴定第95-96页
     ·启动子融合GFP蛋白的转基因植株的获得与鉴定第96-97页
     ·基因表达模式的分析第97-98页
4 讨论第98-110页
   ·关于GS1;1、GS1;2和glnA基因功能的探讨第98-102页
     ·转基因植株的生长表型第98-99页
     ·转基因植株的代谢水平第99-100页
     ·转基因植株对非生物胁迫条件的反应第100-102页
   ·关于GS2基因功能的探讨第102-104页
     ·转基因植株的生长表型第102-103页
     ·转基因植株的代谢水平第103-104页
   ·关于GS1;3、NRT2、AMT1;1、AMT1;2和AMT1;3基因功能的探讨第104-106页
   ·关于氮高效利用的转基因水稻新品种培育方法的探讨第106-109页
     ·氮高效利用的转基因水稻新品种的应用前景第106页
     ·超量表达GS1;2转基因植株在育种上的应用前景第106-107页
     ·氮高效利用的转基因水稻培育新方法探讨第107-109页
   ·关于后续工作的设想第109-110页
参考文献第110-134页
致谢第134-135页
附录A 基本实验操作步骤第135-145页
附录B 个人简历第145页

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