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水稻中天冬氨酸转氨酶的分子生物学研究和转基因应用

缩略词表第1-9页
摘要第9-11页
ABSTRACT第11-13页
1 文献综述第13-26页
   ·遗传育种改良品种第13-14页
   ·天冬氨酸转氨酶的研究进展第14-17页
     ·天冬氨酸和天冬酰胺的生物合成第14-15页
       ·天冬氨酸的生物合成第14页
       ·天冬酰胺的生物合成第14-15页
     ·天冬氨酸转氨酶的进展分析第15页
     ·天冬氨酸转氨酶的克隆第15-16页
     ·天冬氨酸转氨酶的调控第16页
     ·天冬氨酸转氨酶在水稻中的情况第16-17页
   ·稻米蛋白质和氨基酸的研究进展第17-19页
     ·稻米蛋白质的种类第17页
     ·稻米蛋白质的组成和利用第17-18页
     ·影响稻米蛋白质的非遗传因素第18页
     ·蛋白质和氨基酸含量与氨基酸代谢途径基因的关系第18-19页
   ·研究植物基因功能的策略和方法第19-25页
     ·基因功能增加或获得第20页
       ·超量表达(Over-expression)第20页
       ·诱导表达(Inducible expression)第20页
     ·基因功能丧失或减少第20-24页
       ·插入突变第20-21页
       ·反义抑制和共抑制第21-22页
       ·RNA干扰(RNAi)第22-24页
     ·基因的异位表达(Ectopic expression)第24-25页
   ·本研究的意义、目的和创新之处第25-26页
2 材料与方法第26-38页
   ·水稻材料第26页
   ·用于遗传转化的水稻基因片段第26-27页
   ·实验所用到的菌株、质粒、载体和感受态细胞第27页
   ·遗传转化载体的构建和转化第27-30页
     ·骨架载体构建第27-28页
     ·超量表达载体构建第28页
     ·RNAi抑制表达载体的构建第28-29页
     ·遗传转化第29-30页
   ·DNA提取、转基因植株PCR阳性检测及转基因拷贝数检测第30-31页
     ·DNA提取第30页
     ·PCR阳性检测第30-31页
     ·转基因Southern检测第31页
   ·RNA的抽提、反转录及杂交第31页
     ·RNA的抽提,反转录第31页
     ·基因表达NORTHERN检测第31页
     ·转基因植株超量表达检测第31页
   ·PCR、RT-PCR和REAL-TIME PCR的检测第31-32页
   ·水培试验及性状考察第32-35页
     ·转基因植株的形态表型观察初筛和复筛第32-33页
     ·性状考察第33-35页
       ·天冬氨酸转氨酶酶活的测定方法第33-35页
       ·游离NO_3~-的测定方法第35页
       ·游离NH_4~+的测定方法第35页
   ·各种胁迫条件下,培养基种植和性状考察第35-36页
   ·田间种植和性状考察第36-38页
     ·田间实验第36页
     ·性状考察第36-37页
       ·蛋白质含量的测定方法第36-37页
       ·氨基酸含量的测定方法第37页
     ·转基因植株的性状考察初筛第37页
     ·转基因植株的性状考察复筛第37-38页
   ·数据收集、整理与统计分析第38页
3 结果与分析第38-61页
   ·骨架载体构建第38-39页
   ·对天冬氨酸转氨酶基因的获得及序列分析第39-40页
   ·转化载体的构建及遗传转化第40页
   ·T_0代转基因植株PCR阳性分析第40-42页
   ·T_0代转基因植株SOUTHERN拷贝数分析第42-43页
   ·水稻内源基因的表达模式分析第43-47页
     ·基因芯片分析基因家族OsAAT的表达模式第43-44页
     ·RT-PCR分析基因家族OsAAT的表达模式第44-46页
     ·利用RT-PCR,分析基因家族OsAAT在各种胁迫条件下的表达模第46-47页
   ·转基因植株超量表达和抑制表达检测第47-49页
   ·转基因植株中各基因表达量变化的检测第49-52页
   ·转基因植株水培生理生化鉴定第52-61页
     ·T_1代转基因家系在全营养水培条件下,酶活的测定第52-53页
     ·T_1代转基因家系在全营养水培条件下,游离硝酸盐、铵盐和可溶性蛋白的测定第53-55页
     ·T_1代转基因家系对氮胁迫放应的水培实验第55-56页
     ·T_1代转基因家系在培养基上的胁迫实验第56-57页
     ·T_1代转基因植株,米粉中氨基酸的测定第57页
     ·T_2代转基因植株,米粉中氨基酸含量的复筛和蛋白质测定第57-61页
4 讨论第61-72页
   ·对AAT基因功能的探讨第61-66页
     ·AAT基因对氮吸收的影响第61-62页
     ·超量表达AAT基因对植株代谢的影响第62-63页
     ·超量表达AAT基因能提高植株种子里氨基酸含量第63-66页
     ·超量表达AAT基因提高植株种子里氨基酸含量的重要意义第66页
   ·有关基因遗传转化的一些思考第66-72页
     ·关于转化实验一些技术操作问题的思考第66-67页
       ·农杆菌介导法转化水稻的注意问题第66-67页
       ·转基因植株的阳性检测第67页
       ·培养基实验和水培实验第67页
     ·T_0代转基因家系表型不稳定的可能原因第67-68页
     ·筛选标记基因在转基因植物中的应用第68-69页
     ·基因家族中多成员在转基因植物中的表达第69-70页
     ·转基因水稻安全性问题第70-72页
参考文献第72-82页
个人简历第82-83页
致谢第83-84页
附录A第84-85页
附录B第85-92页

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