| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 课题的提出 | 第13-21页 |
| ·干旱胁迫对植物的影响 | 第13-15页 |
| ·干旱与生长发育 | 第13页 |
| ·干旱与细胞膜 | 第13-14页 |
| ·干旱与细胞壁 | 第14页 |
| ·干旱与光合作用 | 第14页 |
| ·干旱与呼吸作用 | 第14-15页 |
| ·植物在非生物胁迫下的信号传导 | 第15页 |
| ·植物在干旱胁迫下诱导表达的基因及蛋白 | 第15-16页 |
| ·干旱胁迫下功能蛋白基因及编码产物 | 第15页 |
| ·干旱胁迫下调节基因及编码产物 | 第15-16页 |
| ·植物基因工程培育抗旱品种的策略 | 第16页 |
| ·渗透调节物质合成酶基因 | 第16页 |
| ·活性氧自由基清除相关基因 | 第16页 |
| ·胁迫诱导的蛋白基因 | 第16页 |
| ·PRP基因的研究现状 | 第16-19页 |
| ·PRP结构 | 第16-17页 |
| ·PRP基因功能 | 第17页 |
| ·PRP基因的表达特征 | 第17-19页 |
| ·单加氧酶基因研究进展 | 第19-20页 |
| ·单加氧酶结构特点 | 第19-20页 |
| ·植物单加氧酶的表达 | 第20页 |
| ·植物单加氧酶的功能 | 第20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的技术路线 | 第21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-31页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株、质粒及主要载体 | 第21-22页 |
| ·常用培养基 | 第22-23页 |
| ·LB液体培养基 | 第22页 |
| ·LB固体培养基 | 第22页 |
| ·烟草遗传转化培养基 | 第22页 |
| ·番茄遗传转化培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·基因克隆特异引物 | 第23页 |
| ·其他引物 | 第23页 |
| ·RT-PCR | 第23-24页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24页 |
| ·SpPRPP基因的获得 | 第24页 |
| ·SpPRP基因的获得 | 第24页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第24-25页 |
| ·TA克隆 | 第25-26页 |
| ·纯化产物与pMD18-T Vector的重组连接 | 第25页 |
| ·重组体的转化与筛选 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的转化鉴定与测序分析 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·Sal I和Kpn I双酶切目的片段 | 第26-27页 |
| ·Kpn I和Xho I双酶切载体pMV | 第27页 |
| ·回收目的片段和载体片段,连接 | 第27-28页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第28-29页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第29页 |
| ·组织表达分析 | 第29页 |
| ·不同逆境胁迫下基因的表达模式 | 第29-30页 |
| ·转基因植株的PCR阳性检测 | 第30页 |
| ·转基因番茄植株抗旱性初步分析 | 第30-31页 |
| ·转基因番茄在20%PEG处理下脯氨酸含量的测定 | 第30页 |
| ·转基因番茄在20%PEG处理下叶片细胞膜伤害率的测定 | 第30-31页 |
| ·转基因番茄T0植株大气保水力的测定 | 第31页 |
| ·转基因烟草抗旱性初步分析 | 第31页 |
| ·转基因烟草相对含水量的测定 | 第31页 |
| ·转基因烟草叶片伤害率的测定 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-51页 |
| ·SpPRPP、SpPRP的克隆与分析 | 第31-39页 |
| ·番茄叶片总RNA的提取及反转录 | 第31-32页 |
| ·SpPRP和SpPRPP基因cDNA的克隆 | 第32-35页 |
| ·SpPRP和SpPRPP基因超量表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·SpPRP和SpPRPP氨基酸序列同源性比较及多序列比对 | 第37-39页 |
| ·转基因植株的获得 | 第39-41页 |
| ·番茄转基因植株的获得 | 第39-40页 |
| ·烟草转基因植株的获得 | 第40-41页 |
| ·转基因植株的PCR阳性检测 | 第41-44页 |
| ·目的基因组织表达分析 | 第44-45页 |
| ·目的基因在不同激素诱导和逆境胁迫下的表达 | 第45-46页 |
| ·转SpCTF2A基因烟草在20%PEG胁迫处理下的变化 | 第46-48页 |
| ·20%PEG处理后转基因烟草和对照叶片相对含水量 | 第47页 |
| ·20%PEG处理后转基因烟草和对照相同部位叶片伤害率 | 第47-48页 |
| ·8%PEG胁迫处理后转基因ZS5游离脯氨酸含量 | 第48-50页 |
| ·AC和M82转SpPRPP、SpCTF2A和SpPRP基因叶片保水力的测定 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·采用芯片杂交法分离和克隆基因 | 第51-52页 |
| ·不同番茄品种的遗传转化 | 第52-53页 |
| ·SpPRPP基因和SpPRPP基因的功能分析 | 第53页 |
| ·外源基因的表达调控 | 第53-54页 |
| 5 后期工作展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-66页 |
| 附录一:植物DNA的小量法提取程序 | 第62-63页 |
| 附录二:TriZOL一步法提取植物总RNA方法 | 第63-64页 |
| 附录三:质粒的小量提取方法 | 第64-65页 |
| 附录四:大肠杆菌热击感受态的制备 | 第65-66页 |
| 附录五:农杆菌感受态细胞的制备 | 第66页 |
