中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
1 引言 | 第11-29页 |
·农杆菌的基本特征 | 第11-18页 |
·农杆菌的组成 | 第11-13页 |
·农杆菌介导转化的机理 | 第13-16页 |
·农杆菌对受体的识别与附着 | 第13-14页 |
·农杆菌对特异的植物信号分子的感应 | 第14页 |
·vir 区基因的表达(vir 基因活化) | 第14页 |
·T-DNA 链的复制合成(T-DNA 加工) | 第14-15页 |
·毒性蛋白转移复合体的形成及T-DNA 转移 | 第15页 |
·成熟T-复合物的形成及其核输入 | 第15页 |
·T-DNA 整合到植物基因组 | 第15-16页 |
·农杆菌介导的转化方法 | 第16-17页 |
·农杆菌介导的遗传转化特点 | 第17-18页 |
·农杆菌介导转化在单子叶植物取得的成就 | 第18-26页 |
·根癌农杆菌介导禾本科作物的研究 | 第18-23页 |
·根癌农杆菌介导非禾本科单子叶植物的研究 | 第23-26页 |
·存在的问题与展望 | 第26-28页 |
·植物受体因子与农杆菌间的作用机理 | 第26页 |
·转化范围 | 第26-27页 |
·转化率 | 第27页 |
·Ti 载体容量 | 第27-28页 |
·发展趋势 | 第28页 |
·本研究的目的意义 | 第28-29页 |
2 材料与方法 | 第29-40页 |
·材料 | 第29-33页 |
·植物材料 | 第29页 |
·农杆菌菌株及质粒 | 第29页 |
·试剂 | 第29-32页 |
·常用的缓冲液和试剂成分的配制 | 第30-32页 |
·质粒DNA 提取及纯化所用的试剂 | 第30页 |
·植物DNA 提取及纯化所用的试剂 | 第30-31页 |
·琼脂糖凝胶电泳所缓冲液 | 第31页 |
·Southern 杂交所用试剂 | 第31-32页 |
·其他试剂 | 第32页 |
·仪器设备 | 第32页 |
·培养基 | 第32-33页 |
·植物培养基 | 第32页 |
·农杆菌培养基(YEB) | 第32-33页 |
·方法 | 第33-40页 |
·愈伤组织的诱导及再生体系的建立 | 第33-34页 |
·大葱种子表面灭菌 | 第33页 |
·不同外植体的获得及愈伤组织的诱导 | 第33页 |
·未经处理的种子 | 第33页 |
·切口处理的种子 | 第33页 |
·中切处理的种子 | 第33页 |
·愈伤组织的继代培养 | 第33页 |
·愈伤组织的分化 | 第33-34页 |
·再生苗的生根 | 第34页 |
·再生苗的壮苗移栽 | 第34页 |
·大葱遗传转化体系的建立 | 第34页 |
·Cef 的抑菌试验 | 第34页 |
·农杆菌介导大葱转化体系的建立 | 第34页 |
·农杆菌培养及菌液制备 | 第34页 |
·愈伤组织的转化 | 第34-35页 |
·洗菌 | 第35页 |
·愈伤组织分化培养 | 第35页 |
·愈伤组织的生根培养 | 第35页 |
·遗传转化的主要影响因素 | 第35页 |
·gus 基因表达检测(组织化学染色) | 第35-36页 |
·转基因植株的分子鉴定 | 第36-38页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第36-37页 |
·转化植株的 DNA 提取(CTAB 小量提取法) | 第37页 |
·转基因植株 PCR 检测 | 第37-38页 |
·Southern 印记杂交 | 第38-40页 |
·探针的制备 | 第38页 |
·PCR-Southern 杂交 | 第38-40页 |
3 结果与分析 | 第40-48页 |
·不同外植体愈伤诱导 | 第40-41页 |
·大葱遗传转化系统的建立 | 第41-48页 |
·抑菌性抗生素Cef 的敏感试验 | 第41-42页 |
·农杆菌介导大葱遗传转化中的几个参数优化 | 第42-45页 |
·农杆菌浓度的影响 | 第42-43页 |
·农杆菌侵染时间的确定 | 第43-44页 |
·共培养时间的影响 | 第44-45页 |
·gus 基因表达的组织化学染色 | 第45-46页 |
·试管苗的驯化移栽 | 第46页 |
·PCR 检测和 southern 杂交 | 第46-48页 |
4 讨论 | 第48-52页 |
·外植体与愈伤率 | 第48-49页 |
·农杆菌的去除对转化的影响 | 第49-50页 |
·转化条件的影响 | 第50-51页 |
·共培养的影响 | 第50-51页 |
·农杆菌的侵染时间以及菌液浓度 | 第51页 |
·gus 基因组织化学染色法可靠性低 | 第51-52页 |
·外源基因整合的多样性 | 第52页 |
5 结论 | 第52-54页 |
6 参考文献 | 第54-65页 |
7 附录 | 第65-66页 |
8 图版说明 | 第66-67页 |
9 致谢 | 第67-68页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第68页 |