| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·水稻黑条矮缩病毒研究概况 | 第9-13页 |
| ·水稻黑条矮缩病发生及危害 | 第9页 |
| ·水稻黑条矮缩病病害症状 | 第9页 |
| ·水稻黑条矮缩病流行原因分析 | 第9-10页 |
| ·水稻黑条矮缩病测预报及防治对策 | 第10-11页 |
| ·水稻黑条矮缩病传播介体和寄主范围 | 第11页 |
| ·水稻黑条矮缩病病原性质 | 第11-12页 |
| ·RBSDV 分类地位 | 第12页 |
| ·RBSDV 基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| ·RBSDV 检测 | 第13页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第13-18页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第13-14页 |
| ·酵母双杂交系统的特点 | 第14-15页 |
| ·酵母双杂交系统的衍生系统 | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交系统在植物病毒学研究中的应用 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂交系统在水稻黑条矮缩病的应用 | 第18页 |
| ·研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 RBSDV 病毒基因克隆及表达载体构建 | 第19-33页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·供试水稻、菌株和质粒 | 第19页 |
| ·PCR 引物 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-24页 |
| ·水稻病叶总RNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR 扩增 RBSDV S5A、S6、S8、S9-1、S9-2、S10 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物的检测和回收 | 第21页 |
| ·目的片段与pMD18-T 克隆载体连接 | 第21页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第21-22页 |
| ·阳性克隆的鉴定筛选 | 第22-23页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-31页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第24-25页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第25-29页 |
| ·重组酵母表达载体的鉴定 | 第29-31页 |
| ·小结与讨论 | 第31-33页 |
| 3 P6 与若干病毒编码蛋白互作研究 | 第33-38页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·菌株的验证 | 第33页 |
| ·载体和菌株的保存 | 第33-34页 |
| ·AH109 感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·重组质粒转化酵母菌AH109 | 第34页 |
| ·重组质粒的自激活活性检测 | 第34-35页 |
| ·重组质粒对AH109 细胞毒性检测 | 第35页 |
| ·两重组质粒共转化AH109 | 第35页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-37页 |
| ·菌株的验证 | 第36页 |
| ·重组质粒对细胞毒性和自激活活性检测 | 第36-37页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第37页 |
| ·小结与讨论 | 第37-38页 |
| 4 利用酵母双杂交系统筛选水稻CDNA 文库 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·cDNA 文库、菌株和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·PCR 引物 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·酵母菌AH109 感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·cDNA 文库质粒转化酵母菌 | 第38页 |
| ·阳性克隆菌落的筛选 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第39页 |
| ·PCR 鉴定阳性克隆中文库质粒的 cDNA 插入片段 | 第39页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌 DH5α及 PCR 再鉴定 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第40页 |
| ·PCR 鉴定cDNA 插入片段 | 第40-41页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第41-42页 |
| ·小结与讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 附录1 缩略语 | 第48-49页 |
| 附录2 主要试剂与缓冲液配制 | 第49-52页 |
| 附录3 载体图谱 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
