| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1. 黄曲霉毒素简介 | 第13-17页 |
| ·黄曲霉毒素的产生 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素的化学结构及理化性质 | 第14页 |
| ·黄曲霉毒素的毒理学 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素的危害 | 第15-17页 |
| ·降低禽畜采食量 | 第15页 |
| ·损害组织器官 | 第15页 |
| ·抑制免疫机能 | 第15-16页 |
| ·对生物大分子代谢的影响 | 第16-17页 |
| 2. 黄曲霉毒素的致肝癌机制及其差异蛋白质组学 | 第17-20页 |
| ·黄曲霉毒素的致肝癌机制 | 第17-18页 |
| ·线粒体障碍与肝癌发病关系研究 | 第18页 |
| ·黄曲霉毒素诱发肝癌的差异蛋白质组学 | 第18-19页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase, IDH） | 第19-20页 |
| ·真核生物NAD–IDH 的结构与功能 | 第19-20页 |
| ·IDH 在肝病临床诊断中的应用 | 第20页 |
| 3. 基因工程单链抗体技术 | 第20-23页 |
| ·单链抗体简介 | 第20-21页 |
| ·单链抗体的构建 | 第21页 |
| ·单链抗体的表达 | 第21页 |
| ·噬菌体抗体库的构建原理和基本过程 | 第21-23页 |
| ·单链抗体的应用 | 第23页 |
| ·基础理论的研究 | 第23页 |
| ·疾病的免疫诊断和治疗 | 第23页 |
| 4 单克隆抗体技术 | 第23-26页 |
| ·单克隆抗体的概念 | 第23-24页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第24-26页 |
| ·动物的选择与免疫 | 第24页 |
| ·骨髓瘤细胞和饲养细胞的培养 | 第24-25页 |
| ·杂交瘤的选择及抗体检测 | 第25页 |
| ·杂交瘤的克隆化及冻存 | 第25-26页 |
| ·单克隆抗体的大量生产及鉴定 | 第26页 |
| ·单克隆抗体的应用 | 第26页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第26-27页 |
| 第二章 异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因的克隆与表达 | 第27-41页 |
| 引言 | 第27页 |
| 材料与方法 | 第27-35页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| ·研究对象、菌株与质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要培养基 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-35页 |
| ·小鼠肝脏总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·RNA 的反转录 | 第29页 |
| ·PCR 扩增idh3α基因 | 第29-30页 |
| ·融合表达载体pET32a(+)-idh3α的构建 | 第30-32页 |
| ·pET32a(+)的质粒DNA 提取 | 第30-31页 |
| ·目的基因与质粒DNA 的酶切 | 第31页 |
| ·目的基因片段与载体pET-32a(+)连接 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第32-33页 |
| ·BL21 感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的筛选与检测 | 第33页 |
| ·目的蛋白的表达与检测 | 第33-35页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·肝脏总RNA 的提取与idh3α基因的PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·载体的构建 | 第36-39页 |
| ·基因的高效表达纯化 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶idh3α的原核表达载体pET32a(+)-idh3α的构建 | 第40页 |
| ·融合蛋白质在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化 | 第40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 第三章 单链抗体的淘选 | 第41-58页 |
| 引言 | 第41-42页 |
| 材料与方法 | 第42-50页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| ·细胞及细胞株 | 第42页 |
| ·质粒载体 | 第42页 |
| ·PCR 产物 | 第42-43页 |
| ·试剂与材料 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-50页 |
| ·动物免疫 | 第44页 |
| ·测血清效价 | 第44页 |
| ·脾脏总RNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·cDNA 反转录合成 | 第45页 |
| ·重、轻链基因的扩增 | 第45-46页 |
| ·scFv 的组装与扩增 | 第46-47页 |
| ·scFv DNA 片段的SfiⅠ/NotⅠ酶切 | 第47页 |
| ·pCANTAB 5E- scFv 重组质粒的构建 | 第47页 |
| ·重组噬菌体的制备 | 第47-48页 |
| ·库容量的滴定 | 第48页 |
| ·单链抗体噬菌体抗体库的富集淘选 | 第48-49页 |
| ·用ELISA 方法检测IDH 蛋白质特异性的单链抗体 | 第49页 |
| ·scFv 序列分析 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-56页 |
| ·效价的测定 | 第50-51页 |
| ·VH 和VL 的扩增 | 第51页 |
| ·scFv DNA 的组装与扩增 | 第51-52页 |
| ·噬菌体抗体库载体的构建 | 第52页 |
| ·噬菌体抗体库的构建 | 第52页 |
| ·scFv 的噬菌体表面展示与淘选 | 第52-53页 |
| ·scFv 的ELISA 检测 | 第53-54页 |
| ·scFv 的酶切和PCR 验证 | 第54页 |
| ·scFv 测序 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| ·小鼠免疫与效价测定 | 第56页 |
| ·RNA 提取 | 第56页 |
| ·scFv 的组装与扩增 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 第四章 单克隆抗体 | 第58-69页 |
| 引言 | 第58-59页 |
| 材料与方法 | 第59-65页 |
| 1 材料 | 第59页 |
| ·细胞及细胞株 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-65页 |
| ·动物免疫 | 第59页 |
| ·测血清效价 | 第59-60页 |
| ·融合前的细胞准备 | 第60-65页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第60-61页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第61页 |
| ·脾细胞 | 第61-62页 |
| ·细胞融合 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体的检测 | 第63页 |
| ·阳性杂交瘤细胞克隆化 | 第63-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-68页 |
| ·细胞融合后观察 | 第65-66页 |
| ·细胞的融合率 | 第66页 |
| ·细胞融合后的ELISA 结果 | 第66页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第66-67页 |
| ·单克隆抗体的扩大培养 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68页 |
| ·细胞融合 | 第68页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化 | 第68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
