| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 一、前言 | 第11-19页 |
| 1. HCMV功能蛋白研究进展 | 第11-13页 |
| ·HCMV病毒颗粒结构 | 第11-12页 |
| ·HCMV病毒基因组结构 | 第12-13页 |
| ·HCMV UL23基因的研究进展 | 第13页 |
| 2. IFP35蛋白研究进展 | 第13-17页 |
| ·IFP35的发现及命名 | 第13-14页 |
| ·干扰素诱导基因的简介 | 第14页 |
| ·IFP35基因的结构及调控 | 第14-16页 |
| ·课题目的及意义 | 第16-17页 |
| 3. 实验技术路线简图 | 第17-19页 |
| 二、仪器与材料 | 第19-34页 |
| 1. 主要的仪器 | 第19-20页 |
| 2. 主要的材料 | 第20-21页 |
| 3. 引物设计 | 第21-23页 |
| ·IFP35引物设计与合成 | 第21页 |
| ·人工合成Flag tag | 第21页 |
| ·UL23短片断引物设计 | 第21-22页 |
| ·IFP35短片断引物设计 | 第22-23页 |
| 4. 试剂配方 | 第23-34页 |
| ·酵母双杂交 | 第23-27页 |
| ·GST pull-down试验 | 第27-31页 |
| ·Co-IP试剂的配方 | 第31页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第31-34页 |
| 三、实验方法 | 第34-62页 |
| 1. GAL4酵母双杂交试验 | 第34-45页 |
| ·pGADT7-IFP35、pGBKT7-IFP35载体的构建 | 第34-41页 |
| ·酵母的长期保存与复苏 | 第41-42页 |
| ·IFP35与pUL23蛋白自激活活性检测 | 第42-45页 |
| 2. GST pull-down试验 | 第45-51页 |
| ·pGEX-4T-1-IFP35载体的构建(方法参照1.1) | 第45-47页 |
| ·GST-IFP35重组蛋白的表达及纯化 | 第47-49页 |
| ·Cos-7细胞培养及转染 | 第49-50页 |
| ·GST pull-down试验 | 第50页 |
| ·Western blotting试验 | 第50-51页 |
| 3. Co-IP验证试验 | 第51-55页 |
| ·pcDNA3.1(+)-IFP35-Flag质粒的构建 | 第51-53页 |
| ·检测pcDNA3.1(+)-IFP35-Flag在Cos-7细胞中的表达(方法同2.3) | 第53页 |
| ·Co-IP验证试验 | 第53-55页 |
| 4. pUL23与IFP35蛋白宿主细胞中共定位 | 第55-58页 |
| ·构建pEGFP-N1-UL23,pEGFP-N1-IFP35,pDsRed2-IFP35重组子 | 第55-56页 |
| ·培养Hela细胞培养及转染 | 第56-57页 |
| ·细胞核染色 | 第57-58页 |
| 5. pUL23、IFP35与Nmi在生理状态下的结合情况 | 第58-60页 |
| ·培养Hela细胞培养及转染(方法同4.2) | 第58页 |
| ·裂解细胞(方法同2.3) | 第58页 |
| ·6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第58-59页 |
| ·Westen blotting | 第59页 |
| ·银染 | 第59-60页 |
| 6. pUL23对IFP35稳定性的影响 | 第60-62页 |
| ·转染HEK293T细胞(按照Polyfect Transfection Reagent说明书) | 第60-61页 |
| ·裂解细胞(方法同2.3) | 第61页 |
| ·Western blotting(方法同2.5) | 第61-62页 |
| 四、实验结果 | 第62-82页 |
| 1 HCMV pUL23与宿主细胞IFP35蛋白相互作用 | 第62-73页 |
| ·GAL4酵母双杂交试验 | 第62-65页 |
| ·GST pull-down试验 | 第65-67页 |
| ·Co-IP验证试验 | 第67-69页 |
| ·pUL23与IFP35蛋白宿主细胞中共定位 | 第69-73页 |
| 2. pUL23与IFP35蛋白作用结构域的确定 | 第73-79页 |
| ·pUL23与IFP35蛋白相互作用后UL23结构域的确定 | 第73-77页 |
| ·pUL23与IFP35蛋白相互作用后IFP35结构域的确定 | 第77-79页 |
| 3. pUL23功能初步研究 | 第79-82页 |
| ·pUL23、IFP35与Nmi在生理状态下的结合情况 | 第79-80页 |
| ·pUL23对IFP35稳定性的影响 | 第80-82页 |
| 五、小结 | 第82-83页 |
| 六、讨论 | 第83-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 附录 | 第93-102页 |
| 附录1 Genebank公布的HCMV Towne strain UL23基因信息 | 第93-94页 |
| 附录2 Genebank公布的IFP35基因信息 | 第94-95页 |
| 附录3 Genebank公布的Nmi基因信息 | 第95-97页 |
| 附录4 UL23短片段引物设计 | 第97-100页 |
| 附录5 IFP35短片段引物设计 | 第100-101页 |
| 附录6 唐颖关于IFP35在细胞中的定位情况 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
