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猪圆环病毒2型和细小病毒共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
1 引言第11-21页
   ·猪圆环病毒2 型的国内外研究概况第11-18页
     ·病原学第11-12页
     ·流行病学第12-13页
     ·PCV2 致病机制第13-16页
     ·PCV2 的诊断第16-17页
     ·PCV2 的防治第17-18页
   ·研究内容和技术路线第18-19页
     ·研究内容第18-19页
     ·技术路线(见下页)第19页
   ·研究目的与意义第19页
   ·研究目标第19-21页
2 材料第21-27页
   ·毒株第21页
   ·菌株和载体第21页
   ·实验动物第21页
   ·主要试剂第21-25页
     ·RNA 和DNA 提取试剂第21-22页
     ·细胞培养用溶液第22-23页
     ·试剂第23页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液第23-24页
     ·质粒DNA 提取用溶液第24-25页
     ·琼脂糖凝胶电泳用溶液第25页
     ·流式细胞术(FCM)检测用标记抗体第25页
   ·主要仪器第25-27页
3 方法第27-37页
   ·PCR 用引物的设计与合成第27-28页
   ·PAM 抗原递呈功能相关分子、细胞因子和PCV2、PPV 的相关基因片段的重组质粒的构建第28-32页
     ·肺泡巨噬细胞的收集第28页
     ·肺泡巨噬细胞总RNA 的提取第28-29页
     ·PCV2 与PPV DNA 的提取第29页
     ·共刺激分子和细胞因子及 PCV2、PPV 的部分基因片段重组质粒的构建第29-32页
   ·动物实验第32-37页
     ·试验动物分组与感染第32页
     ·PCV2 与PPV 抗体检测第32-33页
     ·PAM 活性检测第33-34页
     ·病毒、细胞因子和CD 分子标准曲线的建立第34页
     ·PAM 中PCV2、PPV 病毒载量的检测第34-35页
     ·PAM 细胞因子表达水平的检测第35-36页
     ·PAM 主要抗原递呈相关分子的检测第36页
     ·数据表示和统计分析第36-37页
4 结果与分析第37-76页
   ·PAM 共刺激分子、细胞因子和PCV2、PPV 目的基因片段重组质粒的鉴定第37-39页
   ·PAM 共刺激分子、细胞因子和PCV2、PPV 目的基因片段标准曲线的建立第39-45页
   ·血清中PCV2 和PPV 抗体检测第45-46页
   ·PAM 中PCV2 与PPV 的含量第46-48页
     ·PAM 中PCV2 核酸的含量第46-47页
     ·PAM 中PPV 核酸的含量第47-48页
   ·PCV2/PPV 共感染对PAM 存活率与吞噬功能的影响第48-56页
     ·PCV2/PPV 共感染对PAM 存活率的影响第48-52页
     ·PCV2/PPV 共感染对PAM 吞噬功能的影响第52-56页
   ·PCV2/PPV 共感染对PAM 中细胞因子表达水平的影响第56-69页
     ·病毒感染猪PAM 表达促炎细胞因子水平的变化第56-60页
     ·病毒感染猪PAM 表达趋化细胞因子水平的变化第60-64页
     ·病毒感染猪PAM 表达调节细胞因子的水平变化第64-69页
   ·PAM 抗原递呈相关分子表达水平的变化第69-76页
     ·PAM 表面SLA-1 和SLA-DR 分子含量的动态变化第69-73页
     ·PAM 中共刺激分子CD80 mRNA 和CD86 mRNA 的动态变化第73-76页
5 讨论第76-82页
   ·Real-time FQ-PCR 标准曲线的建立第76-77页
     ·管家基因的确定第76页
     ·定量方法的确定第76页
     ·Real-time FQ-PCR 存在的问题第76-77页
   ·PAM 活性和吞噬功能动态第77-78页
   ·PAM 表达抗原递呈功能相关分子和细胞因子的动态第78-82页
     ·PCV2 和PPV 共感染对PAM 促炎细胞因子mRNA 水平的影响第78-79页
     ·PCV2 和PPV 共感染对PAM 趋化细胞因子mRNA 水平的影响第79页
     ·PCV2 和PPV 共感染对PAM 调节细胞因子mRNA 水平的影响第79-80页
     ·PAM 表面SLA-1 和SLA-DR 类分子含量的动态变化第80-81页
     ·PAM 中共刺激分子CD80 mRNA 和CD86 mRNA 的动态变化第81-82页
6 结论第82-83页
参考文献第83-89页
附录第89-91页
在读期间发表的学术论文与获得的研究成果第91-92页
作者简介第92-93页
致谢第93-94页

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