| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-19页 |
| ·PRRS 的病原学特点 | 第9-13页 |
| ·病毒的特性 | 第9-10页 |
| ·基因组结构特点 | 第10-13页 |
| ·PRRS 基因组的遗传变异 | 第13-14页 |
| ·PRRSV 流行病学 | 第14-16页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·发病机制 | 第15-16页 |
| ·PRRS 疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| ·研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 材料 | 第19-24页 |
| ·病料 | 第19页 |
| ·细胞、菌种与质粒载体 | 第19页 |
| ·试验所需主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·试验所需主要溶液及其配制 | 第21-24页 |
| ·RNA 提取所用溶液 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化所用试剂 | 第21-22页 |
| ·SDS-PAGE 所用溶液的配制 | 第22页 |
| ·Western-blotting 试剂配制 | 第22-24页 |
| 3 方法 | 第24-32页 |
| ·两株PRRSV 各结构蛋白基因的克隆及遗传变异分析 | 第24-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·反转录合成cDNA | 第25页 |
| ·PCR 扩增PRRSV 各结构蛋白基因 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收纯化 | 第26页 |
| ·PCR 产物与pMDTM19-T 载体的连接 | 第26-27页 |
| ·Top10 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·转化平板的制备 | 第27页 |
| ·连接产物转化Top10 感受态细胞 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 方法筛选阳性克隆 | 第28页 |
| ·目的基因的序列测定及变异分析 | 第28-29页 |
| ·HB-3(cz)株M 基因原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·M 基因与原核表达载体双酶切及连接 | 第29页 |
| ·重组质粒pET-M 转化表达菌株 R-DE3 | 第29页 |
| ·R-DE3 溶原菌的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第30页 |
| ·Western-blotting 检测表达产物 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-39页 |
| ·两株PRRSV 各结构蛋白基因的克隆及变异分析 | 第32-36页 |
| ·两株PRRSV 各结构蛋白基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR 方法鉴定阳性克隆 | 第33页 |
| ·两株PRRSV 各结构蛋白基因序列测定 | 第33页 |
| ·各结构蛋白基因与国内外分离株的同源性分析 | 第33-34页 |
| ·系统进化树分析 | 第34-36页 |
| ·HB-3(cz)株M 基因的原核表达 | 第36-39页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 电泳分析 | 第36页 |
| ·Western-blotting 鉴定分析 | 第36-37页 |
| ·不同诱导温度对重组蛋白表达量的影响 | 第37页 |
| ·不同IPTG 浓度对重组蛋白表达量的影响 | 第37-38页 |
| ·不同诱导时间对重组蛋白表达量的影响 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| ·各结构蛋白基因变异分析 | 第39页 |
| ·M 蛋白的原核表达 | 第39-41页 |
| 6 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 附表 | 第49-55页 |
| 在读期间发表论文 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |