| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表(Abbreviations) | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 粘孢子虫概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 粘孢子虫病的危害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 粘孢子虫的分类概况 | 第15页 |
| 1.1.3 粘孢子虫的生活史 | 第15-16页 |
| 1.1.4 免疫学 | 第16-17页 |
| 1.1.5 粘孢子虫入侵和感染机制研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2 寄生虫主要的蛋白酶抑制剂及其生理功能 | 第18-19页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第18-19页 |
| 1.2.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第19页 |
| 1.3 寄生虫主要的蛋白酶及其生理功能 | 第19-21页 |
| 1.3.1 半胱氨酸蛋白酶 | 第19-20页 |
| 1.3.2 丝氨酸蛋白酶 | 第20页 |
| 1.3.3 天冬氨酸蛋白酶 | 第20-21页 |
| 1.4 课题背景以及研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 1.4.1 课题背景 | 第21页 |
| 1.4.2 研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 粘孢子虫Cystatin基因的生物信息学的分析与克隆表达 | 第23-37页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 仪器 | 第23页 |
| 2.2.2 菌株、试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2.4 引物合成与测序 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 粘孢子虫总DNA、RNA的提取与反转录 | 第24-25页 |
| 2.3.2 粘孢子虫吉陶单极虫Cystatin基因的克隆 | 第25页 |
| 2.3.3 TK Cystatin基因一般生物信息学的分析 | 第25页 |
| 2.3.4 TK Cystatin氨基酸序列同源性与进化关系分析 | 第25-26页 |
| 2.3.5 TK Cystatin基因三级结构模型预测 | 第26页 |
| 2.3.6 TK Cystatin基因TA克隆 | 第26-27页 |
| 2.3.7 吉陶单极虫TK Cystatin基因重组质粒的转化与鉴定 | 第27页 |
| 2.3.8 吉陶单极虫TK Cystatin诱导表达与条件优化 | 第27-28页 |
| 2.3.9 吉陶单极虫TK Cystatin SDS-PAGE以及western-blotting分析 | 第28页 |
| 2.3.10 吉陶单极虫TK Cystatin纯化及浓度的测定 | 第28-29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.4.1 粘孢子虫的形态以及18srDNA的鉴定与TK Cystatin基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.4.2 TK Cystatin基因一般生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.4.3 序列同源性与进化关系分析 | 第31-32页 |
| 2.4.4 TK Cystatin基因三级结构模型预测 | 第32-33页 |
| 2.4.5 吉陶单极虫TK Cystatin基因重组质粒的构建与转化鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4.6 TK Cystatin异源表达与条件优化 | 第34页 |
| 2.4.7 TK Cystatin蛋白的纯化及浓度 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 吉陶单极虫TK Cystatin重组蛋白基本生物学活性的测定 | 第37-43页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 仪器 | 第37页 |
| 3.2.2 试剂 | 第37页 |
| 3.2.3 主要试剂配制 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.3.1 荧光标品AMC的标准曲线的测定 | 第38页 |
| 3.3.2 TK Cystatin对 cathepsinL、papain、cathepsinB的抑制活性及IC_(50)的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.3 TK Cystatin对 papain作用的温度稳定性 | 第39页 |
| 3.3.4 TK Cystatin对 papain作用的pH稳定性 | 第39页 |
| 3.4 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.4.1 荧光标品AMC的标准曲线的测定 | 第39-40页 |
| 3.4.2 TK Cystatin对 cathepsinL、papain、cathepsinB的抑制活性及IC_(50)的测定 | 第40-42页 |
| 3.4.3 TK Cystatin对 papain作用的温度稳定性和pH稳定性 | 第42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 TK Cystatin蛋白与宿主鱼CC cathepsinL的相互作用 | 第43-53页 |
| 4.1 前言 | 第43页 |
| 4.2 实验材料 | 第43-44页 |
| 4.2.1 仪器 | 第43页 |
| 4.2.2 菌株、试剂 | 第43页 |
| 4.2.3 主要试剂配制 | 第43-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.3.1 鲤鱼肠道蛋白中与TK Cystatin相互作用的蛋白的初步筛选 | 第44页 |
| 4.3.2 鲤鱼CC cathepsinL基因的克隆 | 第44-45页 |
| 4.3.3 鲤鱼cathepsinL基因的连接转化与鉴定 | 第45页 |
| 4.3.4 鲤鱼cathepsinL蛋白的的异源表达及条件的优化 | 第45-46页 |
| 4.3.5 鲤鱼cathepsinL蛋白的的纯化 | 第46页 |
| 4.3.6 TK cystatin对鲤鱼CC cathepsinL蛋白作用的验证 | 第46-47页 |
| 4.3.7 鲤鱼cathepsinL活性的测定 | 第47页 |
| 4.4 结果与分析 | 第47-51页 |
| 4.4.1 鲤鱼肠道蛋白中与TK cystatin相互作用的蛋白进行初步筛选 | 第47-48页 |
| 4.4.2 鲤鱼cathepsinL基因的克隆与载体构建 | 第48-49页 |
| 4.4.3 鲤鱼CC cathepsinL蛋白的的异源表达及条件的优化 | 第49页 |
| 4.4.4 鲤鱼CC cathepsinL蛋白的的纯化及浓度测定 | 第49-50页 |
| 4.4.5 鲤鱼CC cathepsinL与 TK Cystatin的pulldown互作验证实验 | 第50-51页 |
| 4.4.6 鲤鱼cathepsinL活性的测定 | 第51页 |
| 4.5 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 吉陶单极虫可分泌蛋白酶的生物信息学的分析与异源表达 | 第53-65页 |
| 5.1 前言 | 第53页 |
| 5.2 实验材料 | 第53页 |
| 5.2.1 菌株、质粒 | 第53页 |
| 5.2.2 仪器 | 第53页 |
| 5.2.3 试剂 | 第53页 |
| 5.2.4 主要试剂配制 | 第53页 |
| 5.2.5 引物合成与测序 | 第53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.3.1 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因一般生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 5.3.2 吉陶单极虫可分泌蛋白酶多序列比对与进化关系分析 | 第54页 |
| 5.3.3 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因的克隆 | 第54-55页 |
| 5.3.4 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因的载体构建与鉴定 | 第55页 |
| 5.3.5 吉陶单极虫可分泌蛋白酶的异源表达及分析 | 第55页 |
| 5.3.6 吉陶单极虫可分泌蛋白酶的SDS-PAGE以及western-blotting分析 | 第55页 |
| 5.4 结果与分析 | 第55-63页 |
| 5.4.1 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因一般生物信息学分析 | 第55-59页 |
| 5.4.2 吉陶单极虫可分泌蛋白酶多序列比对与进化关系分析 | 第59-62页 |
| 5.4.3 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因的克隆 | 第62页 |
| 5.4.4 吉陶单极虫可分泌蛋白酶基因的载体构建与鉴定 | 第62页 |
| 5.4.5 可分泌蛋白酶的表达分析 | 第62-63页 |
| 5.5 讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
