| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 绪论 | 第13-19页 |
| 第一部分 AHNAK2在肾透明细胞癌组织中的表达情况及其与病人临床特性和预后的相关性研究 | 第19-41页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 实验材料 | 第19-22页 |
| 1.2.1 人肾癌细胞株 | 第19页 |
| 1.2.2 人肿癌组织标本 | 第19页 |
| 1.2.3 试剂 | 第19-21页 |
| 1.2.4 仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 实验方法 | 第22-30页 |
| 1.3.1 肾透明细胞癌细胞株培养 | 第22-24页 |
| 1.3.2 肾细胞癌组织、细胞总RNA抽提 | 第24-25页 |
| 1.3.3 实时定量聚合酶链反应 | 第25-27页 |
| 1.3.4 免疫组织化学染色 | 第27-28页 |
| 1.3.5 细胞免疫荧光染色 | 第28-29页 |
| 1.3.6 统计学分析 | 第29-30页 |
| 1.4 实验结果 | 第30-39页 |
| 1.4.1 整合数据分析AHNAK2在肾细胞癌中的表达情况 | 第30-32页 |
| 1.4.2 AHNAK2在肾癌细胞株中的表达分析 | 第32-33页 |
| 1.4.3 AHNAK2在肾透明细胞癌临床样本中的表达分析 | 第33-35页 |
| 1.4.4 AHNAK2的表达水平与肾癌患者临床特性的相关性分析 | 第35-37页 |
| 1.4.5 多类型肿瘤组织芯片分析AHNAK2在肿瘤及正常组织中的表达情况 | 第37-39页 |
| 1.5 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第二部分 AHNAK2在肾透明细胞癌中的生物学功能 | 第41-76页 |
| 2.1 引言 | 第41页 |
| 2.2 实验材料 | 第41-45页 |
| 2.2.1 人肾癌细胞株 | 第41页 |
| 2.2.2 免疫缺陷小鼠 | 第41页 |
| 2.2.3 试剂 | 第41-44页 |
| 2.2.4 仪器 | 第44-45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-59页 |
| 2.3.1 质粒抽提 | 第45-47页 |
| 2.3.2 病毒包装 | 第47-49页 |
| 2.3.3 病毒转染 | 第49页 |
| 2.3.4 细胞增殖 | 第49-50页 |
| 2.3.5 细胞克隆形成 | 第50页 |
| 2.3.6 细胞迁移 | 第50-51页 |
| 2.3.7 细胞凋亡 | 第51页 |
| 2.3.8 实时细胞追踪实验 | 第51-52页 |
| 2.3.9 荷瘤小鼠模型 | 第52-53页 |
| 2.3.10 冰冻切片 | 第53页 |
| 2.3.11 免疫荧光染色 | 第53-54页 |
| 2.3.12 实时荧光定量PCR | 第54-55页 |
| 2.3.13 蛋白免疫印迹 | 第55-58页 |
| 2.3.14 油红O染色 | 第58-59页 |
| 2.4 实验结果 | 第59-74页 |
| 2.4.1 构建AHNAK2敲低的稳转细胞株 | 第59-61页 |
| 2.4.2 敲低AHNAK2对肾癌细胞增殖的影响 | 第61-62页 |
| 2.4.3 敲低AHNAK2对肾癌细胞克隆形成的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.4 敲低AHNAK2对肾癌细胞凋亡的影响 | 第63-65页 |
| 2.4.5 敲低AHNAK2对肾癌细胞迁移的影响 | 第65-69页 |
| 2.4.6 敲低AHNAK2对肾癌细胞皮下成瘤能力的影响 | 第69-71页 |
| 2.4.7 敲低AHNAK2对肾癌细胞脂质合成能力的影响 | 第71-74页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第三部分 AHNAK2促进肾透明细胞癌进展的分子机制 | 第76-109页 |
| 3.1 引言 | 第76页 |
| 3.2 实验材料 | 第76-79页 |
| 3.2.1 人肿瘤细胞株 | 第76页 |
| 3.2.2 试剂 | 第76-78页 |
| 3.2.3 仪器 | 第78-79页 |
| 3.3 实验方法 | 第79-93页 |
| 3.3.1 AHNAK2启动子调取 | 第79-82页 |
| 3.3.2 pAHNAK2 promoter-luc2质粒构建 | 第82-84页 |
| 3.3.3 AHNAK2启动子截短体构建 | 第84-85页 |
| 3.3.4 AHNAK2启动子突变体构建 | 第85-86页 |
| 3.3.5 荧光素酶报告系统 | 第86-87页 |
| 3.3.6 染色质免疫沉淀试验 | 第87-91页 |
| 3.3.7 细胞迁移 | 第91-92页 |
| 3.3.8 免疫荧光染色 | 第92页 |
| 3.3.9 实时荧光定量PCR | 第92-93页 |
| 3.3.10 蛋白免疫印迹 | 第93页 |
| 3.4 实验结果 | 第93-108页 |
| 3.4.1 低氧应激诱导激活AHNAK2表达 | 第93-96页 |
| 3.4.2 AHNAK2的低氧应激性诱导表达依赖于HIF1α | 第96-99页 |
| 3.4.3 HIF1α可增强AHNAK2启动子的转录活性 | 第99-101页 |
| 3.4.4 HIF1α可直接结合到AHNAK2基因的启动子上 | 第101-103页 |
| 3.4.5 敲低AHNAK2抑制低氧诱导的上皮间质转化 | 第103-106页 |
| 3.4.6 敲低AHNAK2抑制低氧诱导的干细胞特性 | 第106-108页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第108-109页 |
| 全文总结 | 第109-111页 |
| 附录1 AHNAK2启动子序列 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第124-126页 |
