| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 甾体化合物概述 | 第8-9页 |
| 1.2 甾体化合物的微生物转化 | 第9-10页 |
| 1.2.1 甾体化合物微生物转化的特点 | 第9-10页 |
| 1.2.2 甾体化合物微生物转化的位置及类型 | 第10页 |
| 1.3 微生物的羟基化反应 | 第10-14页 |
| 1.3.1 微生物羟基化反应原理 | 第11-12页 |
| 1.3.2 微生物羟基化反应类型 | 第12-13页 |
| 1.3.3 微生物羟基化反应的作用 | 第13-14页 |
| 1.3.4 甾体底物的羟基化 | 第14页 |
| 1.3.5 甾体羟化酶的诱导性及其应用 | 第14页 |
| 1.4 新月弯孢霉生物学特征及其研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4.1 新月弯孢霉的生物学特征 | 第14页 |
| 1.4.2 新月弯孢霉甾体羟基化反应研究现状 | 第14-15页 |
| 1.5 新一代高通量测序技术在真菌甾体羟化酶基因克隆鉴定中的应用 | 第15页 |
| 1.6 本课题研究意义 | 第15-16页 |
| 1.7 本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要溶液与缓冲液 | 第19-20页 |
| 2.1.5 培养基与抗生素 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 新月弯孢霉CICC40301的培养及孢子悬液的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2 新月弯孢霉CICC40301菌丝体的培养 | 第21页 |
| 2.2.3 底物的转化 | 第21页 |
| 2.2.4 新月弯孢霉CICC40301羟化酶基因诱导实验 | 第21-22页 |
| 2.2.5 新月弯孢霉CICC40301基因组、总RNA的提取与纯化 | 第22-24页 |
| 2.2.6 cDNA的合成与检测 | 第24-25页 |
| 2.2.7 新月弯孢霉CICC40301转录组测序信息分析 | 第25-28页 |
| 2.2.8 产物的分离纯化及结构鉴定 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-44页 |
| 3.1 新月弯孢霉CICC40301底物转化实验 | 第29-31页 |
| 3.2 转化产物的分离纯化与结构鉴定 | 第31-37页 |
| 3.2.1 新月弯孢霉对孕酮转化产物的分离纯化与鉴定 | 第31-33页 |
| 3.2.2 新月弯孢霉对4AD转化产物的分离纯化与鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.3 新月弯孢霉对睾酮转化产物的分离纯化与鉴定 | 第35-37页 |
| 3.3 新月弯孢霉CICC40301C羟化酶基因的诱导表达实验 | 第37-44页 |
| 3.4.1 新月弯孢霉CICC40301总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.4.2 cDNA的合成及验证 | 第39-40页 |
| 3.4.3 新月弯孢霉CYP基因家族信息分析 | 第40-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 4.1 全文总结 | 第44页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第44页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第44-45页 |
| 5 展望 | 第45-46页 |
| 6 参考文献 | 第46-53页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第53-54页 |
| 8 致谢 | 第54-55页 |
| 9 附录 | 第55-57页 |
