| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 常用中英文缩写词 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 口蹄疫概况 | 第13-17页 |
| 1.1 口蹄疫流行病学 | 第13页 |
| 1.2 口蹄疫病毒概述 | 第13-14页 |
| 1.3 O型口蹄疫病毒VP1基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 口蹄疫疫苗研究进展 | 第15-17页 |
| 2 GEM表面展示技术的研究进展 | 第17-22页 |
| 2.1 微生物表面展示体系 | 第17-19页 |
| 2.2 乳酸菌表面展示系统 | 第19页 |
| 2.3 GEM颗粒表面展示系统 | 第19-22页 |
| 引言 | 第22-24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1.1 菌株、质粒与实验动物、疫苗 | 第24页 |
| 1.2 酶类与主要试剂(盒) | 第24页 |
| 1.3 主要溶液与培养基的配制 | 第24-28页 |
| 1.3.1 抗生素母液 | 第24-25页 |
| 1.3.2 MTT贮存液 | 第25页 |
| 1.3.3 PHA贮存液 | 第25页 |
| 1.3.4 培养基 | 第25页 |
| 1.3.5 PBST缓冲液 | 第25页 |
| 1.3.6 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第25-26页 |
| 1.3.7 蛋白电泳相关溶液 | 第26-27页 |
| 1.3.8 WesternBlot相关溶液 | 第27-28页 |
| 1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 1.5 重组表达质粒pQZ-PA3的构建 | 第28-29页 |
| 1.5.1 PA3基因的扩增 | 第28页 |
| 1.5.2 PCR产物与pQZ的连接与转化 | 第28-29页 |
| 1.6 含FMDV抗原表位的重组表达质粒的构建 | 第29-30页 |
| 1.6.1 FMDV抗原多表位基因的设计与合成 | 第29页 |
| 1.6.2 E.coliBL21感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 1.6.3 多表位基因与pQZ-PA3连接与转化 | 第30页 |
| 1.7 重组蛋白的表达与鉴定 | 第30页 |
| 1.7.1 重组蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| 1.7.2 重组蛋白表达产物的鉴定 | 第30页 |
| 1.8 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第30-31页 |
| 1.8.1 重组蛋白的纯化 | 第30页 |
| 1.8.2 负载蛋白GEM颗粒电镜观察 | 第30-31页 |
| 1.9 O型口蹄疫细菌样颗粒载体疫苗的制备 | 第31页 |
| 1.9.1 细菌样颗粒载体疫苗的制备 | 第31页 |
| 1.9.2 含CVC1302免疫增强剂的BLP疫苗制备 | 第31页 |
| 1.10 实验动物分组及免疫 | 第31-32页 |
| 1.10.1 实验小鼠分组与免疫 | 第31页 |
| 1.10.2 实验猪分组与免疫 | 第31-32页 |
| 1.11 免疫效果检测 | 第32-35页 |
| 1.11.1 抗VP1蛋白的抗体检测 | 第32页 |
| 1.11.2 液相阻断抗体检测 | 第32页 |
| 1.11.3 淋巴细胞转化试验 | 第32-33页 |
| 1.11.4 免疫相关基因mRNA表达水平的检测 | 第33-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-46页 |
| 2.1 重组表达质粒pQZ-PA3的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.1.1 蛋白锚构基因PA3的PCR扩增结果 | 第35页 |
| 2.1.2 重组克隆质粒酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2 含FMDV抗原表位的重组表达质粒的鉴定 | 第36页 |
| 2.3 重组蛋白的表达及鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.1 重组蛋白的表达及可溶性分析 | 第36-37页 |
| 2.3.2 重组蛋白表达产物Westernblotting鉴定 | 第37-38页 |
| 2.4 重组蛋白的纯化鉴定 | 第38-40页 |
| 2.4.1 重组蛋白与GEM颗粒结合后SDS-PAGE鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.2 负载重组蛋白的GEM颗粒的电镜观察 | 第39-40页 |
| 2.5 三种细菌样颗粒疫苗(BLP)对小鼠的免疫效果 | 第40-42页 |
| 2.5.1 免疫血清中VP1蛋白特异性抗体水平 | 第40页 |
| 2.5.2 免疫血清中液相阻断抗体水平 | 第40-41页 |
| 2.5.3 淋巴细胞增殖的增殖水平 | 第41-42页 |
| 2.6 免疫增强型rBTTB细菌样颗粒疫苗的免疫效果 | 第42-46页 |
| 2.6.1 对小鼠的免疫效果 | 第42-44页 |
| 2.6.2 对仔猪的免疫效果 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 3.1 GEM颗粒表面展示系统的组成、作用及其在口蹄疫病毒疫苗研制中的应用 | 第46-47页 |
| 3.2 口蹄疫病毒BLP疫苗的免疫评价 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
