| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第15-16页 |
| 1.2 杀虫晶体蛋白(ICPs) | 第16-17页 |
| 1.3 营养期杀虫蛋白(VIPs) | 第17-24页 |
| 1.3.1 Vip1/Vip2蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Vip3A蛋白研究现状 | 第18页 |
| 1.3.3 Vip3A蛋白的结构和功能 | 第18-20页 |
| 1.3.4 Vip3A蛋白的杀虫活性 | 第20页 |
| 1.3.5 Vip3A蛋白的杀虫机制 | 第20-23页 |
| 1.3.6 VIPs的应用前景 | 第23-24页 |
| 1.4 甜菜夜蛾的危害及防治 | 第24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与仪器 | 第26-31页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第26-28页 |
| 2.2 实验试剂的配制 | 第28-31页 |
| 3 试验方法 | 第31-46页 |
| 3.1 分子克隆相关实验 | 第31-39页 |
| 3.1.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 3.1.2 质粒DNA转化 | 第31-32页 |
| 3.1.3 质粒DNA小提 | 第32页 |
| 3.1.4 DNA样品琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 3.1.5 琼脂糖回收DNA片段 | 第33页 |
| 3.1.6 Vip3A突变体的扩增 | 第33-37页 |
| 3.1.7 目的基因原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2 蛋白的原核表达与纯化实验 | 第39-41页 |
| 3.2.1 IPTG诱导目的蛋白的表达 | 第39页 |
| 3.2.2 可溶性目的蛋白的制备 | 第39页 |
| 3.2.3 IDA-Ni亲和层析柱纯化目的蛋白 | 第39-40页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第40-41页 |
| 3.3 蛋白活化相关实验 | 第41-42页 |
| 3.3.1 甜菜夜蛾中肠液的制备 | 第41页 |
| 3.3.2 中肠液活化目的蛋白不同时间的检测 | 第41页 |
| 3.3.3 胰酶活化目的蛋白不同时间的检测 | 第41页 |
| 3.3.4 Vip3A蛋白活化毒素稳定的检测 | 第41-42页 |
| 3.4 Vip3A活化毒素的N段测序 | 第42-43页 |
| 3.4.1 Vip3A活化毒素的获取 | 第42页 |
| 3.4.2 转膜 | 第42页 |
| 3.4.3 染色 | 第42页 |
| 3.4.4 测序 | 第42-43页 |
| 3.5 受体结合相关实验 | 第43-44页 |
| 3.5.1 甜菜夜蛾BBMV的制备 | 第43页 |
| 3.5.2 Vip3A蛋白的生物素标记 | 第43页 |
| 3.5.3 Vip3A与甜菜夜蛾BBMV受体结合 | 第43-44页 |
| 3.5.4 目的蛋白与BBMV受体竞争结合实验 | 第44页 |
| 3.6 目的蛋白对甜菜夜蛾杀虫活性测定 | 第44-45页 |
| 3.7 甜菜夜蛾中肠的电镜观察 | 第45-46页 |
| 4 实验结果 | 第46-71页 |
| 4.1 Vip3Aa60蛋白活化机制的探究 | 第46-57页 |
| 4.1.1 Vip3Aa60蛋白表达纯化的检测 | 第46-47页 |
| 4.1.2 Vip3Aa60中肠液活化的检测 | 第47页 |
| 4.1.3 Vip3Aa60活化毒素的N端测序 | 第47-49页 |
| 4.1.4 Vip3Aa60胰酶活化的检测 | 第49-50页 |
| 4.1.5 Vip3Aa60突变体基因的克隆 | 第50-52页 |
| 4.1.6 Vip3Aa60突变体原核表达载体构建 | 第52-54页 |
| 4.1.7 Vip3Aa60突变体表达纯化的验证 | 第54页 |
| 4.1.8 Vip3Aa60突变体中肠液和胰酶活化 | 第54-56页 |
| 4.1.9 Vip3Aa60突变体蛋白对甜菜夜蛾杀虫活性的测定 | 第56页 |
| 4.1.10 Vip3Aa60及突变体蛋白对甜菜夜蛾中肠组织的影响 | 第56-57页 |
| 4.2 Vip3Aa60与Vip3Ad5杀虫毒力差异的探究 | 第57-71页 |
| 4.2.1 Vip3Aa60与Vip3Ad5杀虫活性的差异 | 第57-58页 |
| 4.2.2 Vip3Aa60与Vip3Ad5氨基酸序列的差异 | 第58-59页 |
| 4.2.3 Vip3Aa60与Vip3Ad5中肠液活化的差异 | 第59-61页 |
| 4.2.4 Vip3Ad5活化毒素N端测序结果 | 第61-62页 |
| 4.2.5 Vip3Ad5突变体基因的克隆 | 第62-63页 |
| 4.2.6 Vip3Ad5突变体原核表达载体的构建 | 第63-65页 |
| 4.2.7 Vip3Ad5突变体蛋白表达纯化的验证 | 第65-66页 |
| 4.2.8 Vip3Ad5突变体中肠液和胰酶活化 | 第66-67页 |
| 4.2.9 Vip3Aa60与Vip3Ad5活化毒素稳定性的差异 | 第67-69页 |
| 4.2.10 Vip3Aa60和Vip3Ad5与受体结合的差异 | 第69-70页 |
| 4.2.11 Vip3Aa60与Vip3Ad5对甜菜夜蛾中肠组织影响的差异 | 第70-71页 |
| 5 讨论 | 第71-75页 |
| 5.1 Vip3Aa60原毒素活化分析 | 第71-72页 |
| 5.2 Vip3Aa60和Vip3Ad5杀虫毒力差异的分析 | 第72-75页 |
| 6 结论与展望 | 第75-76页 |
| 6.1 结论 | 第75页 |
| 6.2 展望 | 第75-76页 |
| 7 参考文献 | 第76-85页 |
| 硕士期间发表论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
