| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1 伪狂犬病毒的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 猪伪狂犬病毒研究 | 第12-14页 |
| 1.1.1 猪伪狂犬病毒粒子 | 第12页 |
| 1.1.2 猪伪狂犬病毒理化性质 | 第12-13页 |
| 1.1.3 猪伪狂犬病毒的主要糖蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2 临床症状 | 第14页 |
| 2 诊断方法 | 第14-18页 |
| 2.1 常规诊断方法 | 第14-15页 |
| 2.1.1 病毒分离及鉴定 | 第14-15页 |
| 2.1.2 电镜观察 | 第15页 |
| 2.1.3 动物实验 | 第15页 |
| 2.2 血清学诊断方法 | 第15-17页 |
| 2.2.1 血清中和实验(SN) | 第15页 |
| 2.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15-16页 |
| 2.2.3 免疫荧光染色(IF) | 第16页 |
| 2.2.4 乳胶凝集试验(LAT) | 第16页 |
| 2.2.5 琼脂免疫扩散试验(AGID) | 第16-17页 |
| 2.2.6 免疫胶体金技术(GICT) | 第17页 |
| 2.3 分子生物学诊断方法 | 第17-18页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第17页 |
| 2.3.2 核酸探针技术 | 第17页 |
| 2.3.3 原位杂交技术(insituhybridization,ISH) | 第17-18页 |
| 3 防控 | 第18页 |
| 4 单克隆抗体的研究进展 | 第18-21页 |
| 4.1 单克隆抗体技术 | 第18页 |
| 4.2 单克隆抗体的发展 | 第18-19页 |
| 4.3 单克隆抗体的应用 | 第19-21页 |
| 4.3.1 检测鉴定的应用 | 第19页 |
| 4.3.2 定位诊断的应用 | 第19页 |
| 4.3.3 肿瘤诊疗中的应用 | 第19页 |
| 4.3.4 蛋白质提纯的应用 | 第19-20页 |
| 4.3.5 作为免疫抑制剂 | 第20页 |
| 4.3.6 作为研究工作中的探针 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-24页 |
| 第二章 猪伪狂犬病毒囊膜蛋白gB、gC和gE基因克隆及原核表达 | 第24-40页 |
| 1 材料与方法 | 第24-33页 |
| 1.1 主要材料 | 第24-25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第25-26页 |
| 1.3.1 细菌培养基 | 第25页 |
| 1.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳相关溶液 | 第25页 |
| 1.3.3 Western-blot相关溶液 | 第25页 |
| 1.3.4 纯化蛋白相关溶液 | 第25-26页 |
| 1.4 PRV gB、gC、gE基因克隆 | 第26-31页 |
| 1.4.1 引物设计及合成 | 第26-27页 |
| 1.4.2 病毒扩增及病毒DNA提取 | 第27页 |
| 1.4.3 PCR反应 | 第27-28页 |
| 1.4.4 凝胶电泳及DNA片段纯化回收 | 第28-29页 |
| 1.4.5 重组质粒构建 | 第29-31页 |
| 1.5 重组gB、gC、gE蛋白的诱导表达及鉴定 | 第31-33页 |
| 1.5.1 诱导表达 | 第31-32页 |
| 1.5.2 SDS-PAGE电泳 | 第32页 |
| 1.5.3 Western-blot | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-37页 |
| 2.1 PRV gB、gC、gE基因的PCR扩增与克隆 | 第33-35页 |
| 2.1.1 PRV gB抗原性分析 | 第33-34页 |
| 2.1.2 PRV gC抗原性分析 | 第34页 |
| 2.1.3 PRV gE抗原性分析 | 第34页 |
| 2.1.4 PRV gB_1、gB_2、gC_1、gC_2、gE PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3 重组蛋白鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.1 SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.2 Western-blot | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 第三章 两株抗猪伪狂犬病毒单克隆抗体制备与鉴定 | 第40-52页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 主要材料 | 第40页 |
| 1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 实验材料与设备 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-46页 |
| 2.1 PRV纯化抗原的制备 | 第41页 |
| 2.2 小鼠免疫 | 第41页 |
| 2.3 间接ELISA抗体检测方法 | 第41-42页 |
| 2.4 细胞融合 | 第42-45页 |
| 2.4.1 饲养细胞的制备 | 第42页 |
| 2.4.2 骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)悬液的制备 | 第42-43页 |
| 2.4.3 免疫脾细胞悬液的制备 | 第43页 |
| 2.4.4 HT、HAT选择培养基 | 第43页 |
| 2.4.5 融合步骤 | 第43-44页 |
| 2.4.6 杂交瘤细胞筛选 | 第44页 |
| 2.4.7 杂交瘤细胞的克隆化 | 第44-45页 |
| 2.5 单克隆抗体细胞株的稳定性试验 | 第45页 |
| 2.6 单克隆抗体亚型鉴定及腹水制备 | 第45-46页 |
| 2.7 单克隆抗体与重组蛋白的特异性反应鉴定 | 第46页 |
| 2.8 间接免疫荧光检测 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| 3.1 杂交瘤细胞株的筛选 | 第46页 |
| 3.2 单克隆抗体稳定性试验 | 第46-47页 |
| 3.3 单克隆抗体效价测定 | 第47页 |
| 3.4 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第47页 |
| 3.5 单克隆抗体IFA反应特性鉴定 | 第47-48页 |
| 3.6 Western blot鉴定单克隆抗体 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第四章 猪伪狂犬病毒两株单克隆抗体B细胞表位的初步鉴定 | 第52-64页 |
| 1 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 菌株、毒株、质粒 | 第52页 |
| 1.2 实验试剂 | 第52-53页 |
| 1.3 PRV gC、gE基因分段引物设计及合成 | 第53-54页 |
| 1.3.1 gC基因引物设计及合成 | 第53页 |
| 1.3.2 gE基因引物设计及合成 | 第53-54页 |
| 1.4 PCR扩增与重组质粒构建 | 第54-55页 |
| 1.5 目的蛋白的表达与鉴定 | 第55-56页 |
| 1.5.1 Western blot鉴定目的蛋白的表达 | 第55-56页 |
| 1.5.2 Western blot鉴定gC、gE蛋白B细胞表位 | 第56页 |
| 1.5.3 gC、gE蛋白抗原表位变异分析 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-61页 |
| 2.1 抗gC蛋白2B3单克隆抗体B细胞表位 | 第56-59页 |
| 2.1.1 gC蛋白基因F1～F7片段PCR扩增 | 第56-57页 |
| 2.1.2 gC F1～F7重组蛋白表达及鉴定 | 第57页 |
| 2.1.3 2B3单抗Western blot鉴定gC F1～F7重组蛋白 | 第57-58页 |
| 2.1.4 gC蛋白抗原表位的变异分析 | 第58-59页 |
| 2.2 抗gE蛋白2B3单克隆抗体B细胞表位 | 第59-61页 |
| 2.2.1 gE蛋白基因EF1～EF5片段PCR扩增 | 第59页 |
| 2.2.2 gE EF1～EF5重组蛋白表达及鉴定 | 第59-60页 |
| 2.2.3 5C10单抗Western blot鉴定gE EF1～EF5重组蛋白 | 第60页 |
| 2.2.4 gE蛋白抗原表位的变异分析 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
