| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第16-41页 |
| 1.1 癌症 | 第16-21页 |
| 1.1.1 癌症的概述 | 第16-17页 |
| 1.1.2 全球范围内癌症现状 | 第17-19页 |
| 1.1.3 中国癌症的现状 | 第19-21页 |
| 1.2 癌症的治疗 | 第21-22页 |
| 1.2.1 癌症治疗的方法 | 第21-22页 |
| 1.2.2 癌症治疗的预后情况 | 第22页 |
| 1.3 化疗药物 | 第22-29页 |
| 1.3.1 传统的化疗药物 | 第22-25页 |
| 1.3.2 靶向化疗药物 | 第25-26页 |
| 1.3.3 双药联合治疗策略 | 第26-29页 |
| 1.4 化疗药物的作用机制 | 第29-35页 |
| 1.4.1 细胞凋亡与癌症治疗 | 第29-32页 |
| 1.4.2 细胞自噬与癌症治疗 | 第32-33页 |
| 1.4.3 活性氧(ROS)与癌症治疗 | 第33-35页 |
| 1.4.4 c-Myc在癌症中的作用 | 第35页 |
| 1.5 汉防己甲素 | 第35-37页 |
| 1.5.1 汉防己甲素临床药理学功能 | 第35-36页 |
| 1.5.2 汉防己甲素的抗肿瘤作用 | 第36-37页 |
| 1.6 蛋白激酶抑制剂H89 | 第37-39页 |
| 1.6.1 H89的细胞生理学功能 | 第37-39页 |
| 1.6.2 H89与抗肿瘤作用 | 第39页 |
| 1.7 本研究的思路及意义 | 第39-41页 |
| 2 实验材料与方法 | 第41-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第41-45页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第41页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第41页 |
| 2.1.3 重组质粒及载体 | 第41页 |
| 2.1.4 实验试剂及药品 | 第41-43页 |
| 2.1.5 抗体 | 第43页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| 2.1.7 主要的实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-58页 |
| 2.2.1 细胞培养相关操作 | 第45-46页 |
| 2.2.2 细胞加药的处理方式 | 第46页 |
| 2.2.3 细胞活力检测 | 第46页 |
| 2.2.4 药物协同分析 | 第46-47页 |
| 2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第47页 |
| 2.2.6 平板克隆形成 | 第47页 |
| 2.2.7 Western Blot蛋白免疫印迹实验 | 第47-49页 |
| 2.2.8 细胞内活性氧ROS的检测 | 第49页 |
| 2.2.9 线粒体膜电位的检测 | 第49页 |
| 2.2.10 细胞转染 | 第49-50页 |
| 2.2.11 GFP-LC3荧光点聚集检测细胞自噬 | 第50页 |
| 2.2.12 吖啶橙染色检测细胞自噬 | 第50页 |
| 2.2.13 Tandem mRFP-GFP-LC3检测自噬流 | 第50-51页 |
| 2.2.14 pHAGE-CMV-MCS-Mcl-1重组质粒的构建 | 第51-53页 |
| 2.2.15 用PLKO.1质粒构建c-Myc shRNA载体 | 第53-54页 |
| 2.2.16 慢病毒包装,细胞感染及稳定细胞系的构建 | 第54页 |
| 2.2.17 动物体内实验方案 | 第54-56页 |
| 2.2.18 组织样蛋白提取 | 第56页 |
| 2.2.19 动物血清中ALT,AST的测定 | 第56页 |
| 2.2.20 组织样MDA检测 | 第56-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-104页 |
| 3.1 H89联合汉防己甲素产生协同抗肿瘤作用 | 第58-62页 |
| 3.1.1 H89和汉防己甲素联合诱导肿瘤细胞死亡 | 第58-60页 |
| 3.1.2 H89和汉防己甲素联合产生协同抗肿瘤效应 | 第60页 |
| 3.1.3 H89和汉防己甲素联合抑制肿瘤细胞克隆形成 | 第60-62页 |
| 3.2 H89联合汉防己甲素协同诱导肿瘤细胞凋亡和自噬 | 第62-68页 |
| 3.2.1 H89联合汉防己甲素协同诱导肿瘤细胞凋亡 | 第62-64页 |
| 3.2.2 H89联合汉防己甲素协同诱导肿瘤细胞自噬 | 第64-67页 |
| 3.2.3 H89联合汉防己甲素协同促进自噬流的发生 | 第67-68页 |
| 3.3 细胞内活性氧(ROS)在H89与汉防己甲素联合抗肿瘤中的作用 | 第68-73页 |
| 3.3.1 H89与汉防己甲素协同激活肿瘤细胞内的活性氧(ROS) | 第68-69页 |
| 3.3.2 清除活性氧ROS能够拯救H89与汉防己甲素协同诱导的细胞死亡 | 第69-70页 |
| 3.3.3 清除活性氧ROS能够拯救H89与汉防己甲素协同诱导的细胞凋亡 | 第70-71页 |
| 3.3.4 清除活性氧ROS能够拯救H89与汉防己甲素协同诱导的细胞自噬 | 第71-73页 |
| 3.4 PKA和ERK信号通路参与H89和汉防己甲素协同抗肿瘤作用 | 第73-80页 |
| 3.4.1 H89和汉防己甲素协同抑制PKA的活性 | 第73页 |
| 3.4.2 FSK拯救H89和汉防己甲素协同诱导的细胞凋亡 | 第73-74页 |
| 3.4.3 FSK拯救H89和汉防己甲素协同诱导的细胞自噬 | 第74-75页 |
| 3.4.4 H89和汉防己甲素联合激活ERK信号通路 | 第75-77页 |
| 3.4.5 ERK信号通路参与H89和汉防己甲素联合诱导的细胞凋亡 | 第77-78页 |
| 3.4.6 PKA和ERK同时参与H89和汉防己甲素协同诱导的细胞死亡 | 第78-79页 |
| 3.4.7 ROS在PKA和ERK信号通路的上游 | 第79-80页 |
| 3.5 Mcl-1在H89和汉防己甲素协同抗肿瘤中的作用 | 第80-85页 |
| 3.5.1 H89联合汉防己甲素抑制抗凋亡蛋白Mcl-1的表达 | 第80-81页 |
| 3.5.2 外源过表达Mcl-1抑制H89和汉防己甲素联合诱导的细胞凋亡 | 第81-83页 |
| 3.5.3 外源过表达Mcl-1稳定H89联合汉防己甲素诱导的线粒体膜电位 | 第83-84页 |
| 3.5.4 Mcl-1不影响H89和汉防己甲素联合诱导的细胞自噬 | 第84页 |
| 3.5.5 ROS在Mcl-1调节H89和汉防己甲素联合抗肿瘤作用的上游 | 第84-85页 |
| 3.6 c-Myc的表达水平与H89联合汉防己甲素治疗的敏感性有关 | 第85-92页 |
| 3.6.1 c-Myc高表达的细胞对H89和汉防己甲素联合治疗更敏感 | 第86页 |
| 3.6.2 外源过表达c-Myc增加H89和汉防己甲素联合治疗敏感性 | 第86-88页 |
| 3.6.3 敲低c-Myc抑制H89和汉防己甲素联合治疗效果 | 第88-89页 |
| 3.6.4 c-Myc调节抗凋亡蛋白Mcl-1的表达 | 第89-90页 |
| 3.6.5 敲低c-Myc抑制H89和汉防己甲素联合诱导的细胞自噬 | 第90页 |
| 3.6.6 c-Myc调节细胞内ROS的累积 | 第90-92页 |
| 3.7 H89联合汉防己甲素在乳腺癌细胞裸鼠移植模型中的抗肿瘤作用研究 | 第92-97页 |
| 3.7.1 H89联合汉防己甲素显著抑制MDA-MB-231移植瘤在动物体内的生长 | 第92-93页 |
| 3.7.2 H89联合汉防己甲素在动物体内毒性检测 | 第93-95页 |
| 3.7.3 H89联合汉防己甲素诱导动物体内MDA-MB-231移植瘤细胞的凋亡和自噬 | 第95-96页 |
| 3.7.4 H89联合汉防己甲素激活动物体内移植瘤ROS水平 | 第96-97页 |
| 3.8 Mcl-1在H89联合汉防己甲素体内抗肿瘤作用的研究 | 第97-100页 |
| 3.8.1 过表达Mcl-1抑制H89联合汉防己甲素体内抗肿瘤效果 | 第97-99页 |
| 3.8.2 过表达Mcl-1对H89联合汉防己甲素诱导的肿瘤组织蛋白的影响 | 第99-100页 |
| 3.9 c-Myc在H89联合汉防己甲素体内抗肿瘤作用的研究 | 第100-103页 |
| 3.9.1 敲低c-Myc抑制H89联合汉防己甲素体内抗肿瘤效果 | 第100-102页 |
| 3.9.2 敲低c-Myc对H89联合汉防己甲素诱导的肿瘤组织蛋白的影响 | 第102-103页 |
| 3.10 H89联合汉防己甲素协同抗肿瘤作用模式图 | 第103-104页 |
| 4 讨论和展望 | 第104-109页 |
| 4.1 研究讨论 | 第104-107页 |
| 4.2 研究展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-124页 |
| 缩略词表 | 第124-126页 |
| 博士期间发表及待发表的论文 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
