| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-46页 |
| 1.1 前言 | 第15-16页 |
| 1.2 广西地方特色小型猪 | 第16-17页 |
| 1.3 基因修饰猪的构建方法 | 第17-19页 |
| 1.3.1 原核注射法 | 第17页 |
| 1.3.2 慢病毒转染法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 精子介导法 | 第18页 |
| 1.3.4 体细胞核移植法 | 第18-19页 |
| 1.4 核移植技术在猪基因修饰中的应用 | 第19-30页 |
| 1.4.1 猪核移植技术发展历程 | 第19-20页 |
| 1.4.2 应用核移植构建随机整合和同源重组基因修饰猪 | 第20-22页 |
| 1.4.3 核移植结合转座子技术 | 第22-24页 |
| 1.4.4 核移植结合干细胞技术 | 第24-25页 |
| 1.4.5 核移植结合基因编辑技术 | 第25-30页 |
| 1.5 体细胞克隆与转基因克隆猪生产技术体系优化 | 第30-37页 |
| 1.5.1 供体细胞基因修饰 | 第30-32页 |
| 1.5.2 卵母细胞的获取与成熟培养 | 第32-33页 |
| 1.5.3 克隆胚胎构建 | 第33-34页 |
| 1.5.4 克隆胚胎体外培养 | 第34-35页 |
| 1.5.5 胚胎移植 | 第35-37页 |
| 1.6 猪体细胞克隆和转基因克隆技术在农业领域的应用 | 第37-40页 |
| 1.6.1 利用体细胞克隆技术进行猪种质资源保存和良种快繁 | 第37-38页 |
| 1.6.2 利用转基因克隆技术培育转基因猪新品种 | 第38-40页 |
| 1.7 猪体细胞克隆和转基因克隆技术在生物医学领域的应用 | 第40-44页 |
| 1.7.1 制备同型和近交系猪用于生物医学研究 | 第40-41页 |
| 1.7.2 培育猪-人异种移植器官 | 第41-43页 |
| 1.7.3 构建人类疾病基因修饰猪模型 | 第43-44页 |
| 1.8 开展广西地方特色小型猪体细胞克隆和基因修饰的意义 | 第44-46页 |
| 第二章 体细胞克隆巴马小香猪的生产和转基因克隆胚胎的构建 | 第46-68页 |
| 2.1 前言 | 第46-48页 |
| 2.2 材料与方法 | 第48-55页 |
| 2.2.1 动物材料 | 第48页 |
| 2.2.2 主要仪器与耗材 | 第48页 |
| 2.2.3 主要试剂与溶液配制 | 第48-50页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第50-55页 |
| 2.3 试验结果 | 第55-64页 |
| 2.3.1 新生巴马小香猪肾脏成纤维细胞的制备 | 第55-56页 |
| 2.3.2 巴马小香猪克隆胚胎的构建 | 第56页 |
| 2.3.3 克隆巴马小香猪的生产 | 第56-58页 |
| 2.3.4 DNA剂量对细胞转染率和存活率的影响 | 第58页 |
| 2.3.5 孵育时间对细胞转染率和存活率的影响 | 第58-60页 |
| 2.3.6 转基因巴马小香猪肾脏成纤维细胞的制备 | 第60-61页 |
| 2.3.7 转基因与非转基因巴马小香猪克隆胚胎体外发育潜能的比较 | 第61-62页 |
| 2.3.8 转基因巴马小香猪克隆胚胎荧光观察 | 第62-64页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第64-67页 |
| 2.5 小结 | 第67-68页 |
| 第三章 转增强型绿色荧光蛋白基因体细胞克隆环江小香猪的构建 | 第68-82页 |
| 3.1 前言 | 第68页 |
| 3.2 材料与方法 | 第68-70页 |
| 3.2.1 动物材料 | 第68-69页 |
| 3.2.2 主要仪器与耗材 | 第69页 |
| 3.2.3 主要试剂与溶液配制 | 第69页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第69-70页 |
| 3.3 试验结果 | 第70-79页 |
| 3.3.1 环江小香猪皮肤成纤维细胞的制备 | 第70-72页 |
| 3.3.2 转GFP基因环江小香猪皮肤成纤维细胞的制备 | 第72-73页 |
| 3.3.3 环江小香猪克隆与转基因克隆胚胎的制备与体外发育 | 第73-74页 |
| 3.3.4 Scriptaid提高环江小香猪克隆与转基因克隆胚胎体外发育潜能 | 第74页 |
| 3.3.5 转基因环江小香猪的生产 | 第74-76页 |
| 3.3.6 细胞与组织荧光观察 | 第76-79页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第79-81页 |
| 3.5 小结 | 第81-82页 |
| 第四章 转hGFAP-DsRed基因体细胞克隆巴马小香猪的构建 | 第82-94页 |
| 4.1 前言 | 第82-83页 |
| 4.2 材料与方法 | 第83-85页 |
| 4.2.1 动物/细胞材料 | 第83页 |
| 4.2.2 主要仪器与耗材 | 第83页 |
| 4.2.3 主要试剂与溶液配制 | 第83页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第83-85页 |
| 4.3 结果与分析 | 第85-91页 |
| 4.3.1 转hGFAP-DsRed基因体细胞制备 | 第85-86页 |
| 4.3.2 转基因巴马小香猪的生产 | 第86-88页 |
| 4.3.3 基因型鉴定与转基因克隆猪生长发育追踪 | 第88-90页 |
| 4.3.4 组织学鉴定 | 第90-91页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第91-93页 |
| 4.5 小结 | 第93-94页 |
| 第五章 携带帕金森氏症α-突触核蛋白致病突变巴马小香猪的构建 | 第94-116页 |
| 5.1 前言 | 第94-95页 |
| 5.2 材料与方法 | 第95-99页 |
| 5.2.1 动物/细胞材料 | 第95页 |
| 5.2.2 主要仪器与耗材 | 第95页 |
| 5.2.3 主要试剂与溶液配制 | 第95页 |
| 5.2.4 实验方法 | 第95-99页 |
| 5.3 试验结果 | 第99-112页 |
| 5.3.1 突变靶点设计 | 第100-103页 |
| 5.3.2 同源修复模板质粒和CRISPR/Cas9质粒的制备 | 第103页 |
| 5.3.3 基因编辑细胞的制备 | 第103-107页 |
| 5.3.4 基因编辑体细胞克隆猪的生产和基因型鉴定 | 第107-109页 |
| 5.3.5 组织病理鉴定 | 第109-112页 |
| 5.4 分析与讨论 | 第112-114页 |
| 5.5 小结 | 第114-116页 |
| 总结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-141页 |
| 英文缩写-中文名称对照表 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 | 第143-144页 |
