| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第18-19页 |
| 前言 | 第19-32页 |
| 一、概述 | 第19-24页 |
| 二、神经纤毛蛋白-1的生物学特性 | 第24-28页 |
| 2.1 Neuropilin-1的发现 | 第24-25页 |
| 2.2 Neuropilin-1的结构 | 第25-26页 |
| 2.3 Neuropilin-1的分布 | 第26-27页 |
| 2.4 Neuropilin-1的配体与共受体 | 第27-28页 |
| 三、神经纤毛蛋白-1的功能 | 第28-32页 |
| 3.1 NRP-1与神经发育 | 第28页 |
| 3.2 NRP-1与肿瘤新生血管的形成 | 第28-29页 |
| 3.3 NRP-1与肿瘤的生长 | 第29页 |
| 3.4 NRP-1与肿瘤的迁移及凋亡 | 第29-30页 |
| 3.5 NRP-1与免疫功能 | 第30页 |
| 3.6 NRP-1对化疗的影响 | 第30-32页 |
| 第一章 NRP-1 mAb的制备、纯化及鉴定 | 第32-42页 |
| 一、实验材料 | 第32-36页 |
| 1.1 细胞株和实验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第33页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第33-36页 |
| 二、实验方法 | 第36-39页 |
| 2.1 杂交瘤细胞的培养 | 第36页 |
| 2.2 NRP-1mAb 的制备 | 第36-37页 |
| 2.3 NRP-1mAb的纯化 | 第37-38页 |
| 2.4 SDS-PAGE测抗体纯度 | 第38页 |
| 2.5 BCA法测抗体浓度 | 第38页 |
| 2.6 间接ELISA测定抗体滴度 | 第38-39页 |
| 三、结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.1 抗体的纯度及浓度 | 第39-40页 |
| 3.2 抗体效价测定 | 第40页 |
| 四、讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 rhVEGI-192的提取、复性、纯化及鉴定 | 第42-47页 |
| 一、实验材料 | 第42-44页 |
| 1.1 细胞株 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第42页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第42页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第42-44页 |
| 二、实验方法 | 第44-46页 |
| 2.1 rhVEGI-192蛋白的提取 | 第44-45页 |
| 2.2 rhVEGI-192蛋白的纯化 | 第45页 |
| 2.3 rhVEGI-192蛋白的复性 | 第45页 |
| 2.4 rhVEGI-192蛋白的浓缩 | 第45-46页 |
| 三、结果与分析 | 第46-47页 |
| 3.1 SDS-PAGE测定SDS-PAGE测定rhVEGI-192的纯度 | 第46页 |
| 3.2 BCA法测定rhVEGI-192的浓度 | 第46-47页 |
| 第三章 NRP-1在HepG2肝癌细胞上的表达 | 第47-53页 |
| 一、实验材料 | 第47-48页 |
| 1.1 细胞株 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第47页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第47-48页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第48页 |
| 二、实验方法 | 第48-50页 |
| 2.1 细胞培养 | 第48页 |
| 2.2 Western blotting检测NRP-1mAb的亲和性 | 第48-49页 |
| 2.3 细胞免疫荧光染色 | 第49-50页 |
| 2.4 流式细胞术 | 第50页 |
| 三、结果与分析 | 第50-52页 |
| 3.1 Western blotting | 第50-51页 |
| 3.2 细胞免疫荧光染色 | 第51-52页 |
| 3.3 流式细胞术 | 第52页 |
| 四、讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 NRP-1mAb对肝癌HepG2细胞的生长抑制及促凋亡作用 | 第53-65页 |
| 一、实验材料 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞株 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第53-54页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第54页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第54页 |
| 二、实验方法 | 第54-56页 |
| 2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 2.2 细胞增殖抑制实验(MTT法) | 第54-55页 |
| 2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第55页 |
| 2.4 Western blotting | 第55-56页 |
| 2.5 统计学处理 | 第56页 |
| 三、结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.1 NRP-1mAb抑制肝癌HepG2细胞增殖 | 第56-59页 |
| 3.1.1 普通显微镜观察细胞形态 | 第56-57页 |
| 3.1.2 细胞生长抑制实验 | 第57-58页 |
| 3.1.3 Western blotting检测AKT、P-AKT、ERK1/2、P-ERK1/2的表达 | 第58-59页 |
| 3.2 NRP-1mAb促进肝癌HepG2细胞凋亡 | 第59-61页 |
| 3.2.1 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第59-61页 |
| 3.2.2 Western blotting检测Caspase3、PARP、P38MAPK、P-P38MAPK的表达 | 第61页 |
| 四、讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 NRP-1mAb对肝癌HepG2细胞增殖抑制的作用机制 | 第61-62页 |
| 4.2 NRP-1mAb诱导HepG2细胞凋亡的作用机制 | 第62-65页 |
| 第五章 NRP-1mAb联合rhVEGI-192对HepG2肝癌移植瘤的放射增敏作用及其机制探究 | 第65-86页 |
| 一、实验材料 | 第65-66页 |
| 1.1 细胞株和实验动物 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第65-66页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第66页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第66页 |
| 二、实验方法 | 第66-69页 |
| 2.1 HepG2肝癌裸鼠移植瘤模型的建立 | 第66页 |
| 2.2 对HepG2肝癌裸鼠移植瘤的处理 | 第66-67页 |
| 2.3 观测指标 | 第67页 |
| 2.4 Western blotting | 第67-68页 |
| 2.5 免疫组织化学染色法 | 第68-69页 |
| 2.6 统计学处理 | 第69页 |
| 三、结果与分析 | 第69-82页 |
| 3.1 肿瘤生长延迟时间和增敏系数 | 第69-70页 |
| 3.2 裸鼠体重变化曲线 | 第70-72页 |
| 3.3 移植瘤的生长曲线 | 第72-73页 |
| 3.4 Western blotting检测HIF1a、PTEN、Caspase3、PARP的表达 | 第73-76页 |
| 3.5 免疫组织化学染色法检测肿瘤组织血管标记物VE-cadherin、Ⅳ胶原、CD31的表达 | 第76-82页 |
| 四、讨论 | 第82-86页 |
| 结论和展望 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第98页 |
